Ньюкаслська хвороба

Відео: Ньюкаслська хвороба - вакцинація курей.

ньюкаслська хвороба- Newcastle disease (ND), Avian pneumoencephalitis, Ranikhet (англ.), Asiatische oder Atypishe Geflugelpest, Newcastle-Kraukheit, Psevdovogelpest (нім.) - (НБ), псевдочума птахів - це високо контагіозна вірусна інфекція, головним чином курячих, що характеризується пневмонією, енцефалітом, множинними крапковими крововиливами та ураженням внутрішніх органів. Зареєстрована на всіх континентах. Відноситься до особливо небезпечних інфекцій. Її вперше діагностував і описав Краневельд в 1927 р на острові Ява.

Відомості про збудника. Вірус вперше виділив Кранвельд (1927) і описав Доїв (1940).

Морфологія і хімічний склад. Розмір віріонів від 120 до300 нм. Оболонка віріонів має виступи нитки довжиною 8 нм і містить АГ-компоненти. Внутрішній компонент - нуклеокапсид (G-АГ) являє собою довгу загострену гудзик діаметром 13 нм. Структурні одиниці - протеїни цієї трубки (капсомери) розташовані по спіралі навколо центральної осі, всередині них знаходиться РНК. Визначено повний геномвіруса (12492 підстави), з`ясовано ступінь структурної однорідності у різних штамів методом "фінгерпрінт" (відбитків пальців). Виявилося, що РНК велогенних штамів в США (Са-1083 Фонтана і Ларго) виявила високий рівень структурної однорідності. Навпаки, при порівнянні "фінгерпрінт" олігонуклеотидів РНК шт. Фонтана і Техас GB виявлена найменша ступінь однорідності.

Як патогенні, так і апатогенние штами вірусу НБ містять 6 поліпептидів: Z, HN, F, M, NP і поліпептид з мовляв. м. 47000 Д. В складі вірусу виявлено 3 основних і 5 мінорних білкових компонентів. В якій мірі вони відповідають 6 вищевказаним поліпептидам невідомо. До основних відносяться гемаглютинін, білок внутрішньої оболонки і білок РНП. Нейрамінідазу - один з мінорних компонентів. Крім цього, в вирионах вірусу НБ виявлено ендорібонуклеаза, а у вірусі, отриманому з хронічно інфікованих клетокZ, РНК-залежна ДНК-полімераза (зворотна транскриптаза). Можливо, є зв`язок між наявністю зворотної транскриптази і здатністю вірусу викликати хронічно протікає інфекцію. Очищений нуклеокапсид не володіє РНК-полімеразної активністю, так як не містить необхідних білків, або в процесі приготування препарату нуклеокапсидов інактивується сам ензим.

Віріон і клітинний поліпептиди, які мають однаковою електрофоретичної рухливістю, ідентичні. Неспецифічний вірусний глікопротеїн Fo, виявлений тільки в заражених клітинах, родинний малому віріони гликопротеидами F. Поліпептид NP (мол.м.53 000) із заражених клітин споріднений нуклеокапсідний білку NP. В сумі мовляв. м. 6-й вірусних поліпептидів дорівнює 491000 Д, що відповідає максимальній кодує здатності геномавіруса НБ. Білок Fo грає основну роль в вірулентності вірусу. Він синтезується у вигляді неактивного попередника - білка Fo і розщеплюється тріпсіноподобних ферментом в трансмембранних комплексах Гольджі на 2 субодиниці F1 і F2. Це необхідно для прояву інфекційності і становить сутність протеолітичної активації вірусу.

Стійкість. Інфекційність, гемагглютинирующих активність і імуногенність вірусу руйнуються при 56 ° С в період 5 хв - 6 ч. При 37 ° С ці зміни настають через кілька годин і навіть днів, при 20 і 8 ° С для втрати вірусом своєї біологічної активності потрібні місяці і навіть роки. Вірус стійкий до низької температури, в замороженому стані активність його зберігається понад 2-х років. Немає кореляції між рівнем вірулентності і ГА-активності штамів вірусу при прогріванні. Вірус стійкий до рН в діапазоні від 2 до 10, швидко руйнується при впливі ультразвуку. Розчини формаліну (1-2% -ні), гідроксиду натрію (1-2% -ні), мильного крезолу (1% -ний) і фенолу (3-4% -ні) його швидко вбивають. Стабільність вірусу в значній мірі залежить від середовища, в якій він знаходиться Під впливом денного світла інфекційність його знижується за 4 год на 3-5 lg ГА свойcтва зберігаються при більш тривалій інактивації, ніж інфекційні. Встановлено, що вісцеротропние велогенние штами мають термочутливим, а лентогенние - термостабільним ГА, тобто вірулентність штамів прямо не пов`язана з термостабильностью ГА.

Антигенна структура. Вірус містить гемаглютинін інейрамінідазу, М-, F-білки і S (РНП) - антигени, що розрізняються по локалізації в вирионе, імуногенності і АГ-активності. Кожен віріон містить певну кількість ідентичних молекул HN, кожна молекула HN містить 2 домену `НА і NA.Каждий домен містить ідентичні або відмінні один від одного АГ-детермінанти (епітопи). У молекулі F-протеїну виявлено 4 різних АГ-сайту. AT до сайтів 1,2 і 3 запобігають вірус індукований гемоліз еритроцитів птахів. AT до сайту 4 інгібують або гемоліз, або руйнування клітин АГ-активність F-протеїну висококонсерватівна, тому рекомбінантні штами, які експресують білок F, бажані в якості кандидатів для живих вакцин. Крім того, при вакцінацііптіци білком F можна легко диференціювати імунну відповідь, індукований вакцинацією, від імунної відповіді, пов`язаного з інфекцією. На противагу F-білку, ГА та нейрамінідази мають виражену АГ-мінливістю. Відмінності в вірулентності штамів вірусу НБ пов`язані зі зміною в структурі HN-гена, що кодує ГА-нейраминидазу. Більшість амінокислотних замін розташовується в чотирьох ділянках N-кінця HN-білка. Є, свідоцтва про зв`язок вірулентності вірусу НБ з розщепленням глікопротеїну злиття (білка Fo) клітинними протеазами, або зміною інших властивостей білків F і HN.

Антигенна активність. Глікопротеїдний ГА-нейрамінідазной комплекс вірусу (шт. La-Sota) володіє вираженою АГ і протективной активністю на курей. Більшість досліджених клонів монАТ проти ГА-нейрамінідази вірусу НБ в рівній мірі викликають обидва варіанти злиття.

Антигенна варіабельність і спорідненість. Переважна більшість польових і вакцинних штамів вірусу НБ в АГ і иммунобиологическом відносинах схоже. Деякі природно-ослаблені штами (F, Bl, La Sola, КД, Beaudette, Бор / 74 / ВГНКИ і ін.) Широко використовують в якості живих вакцин. Встановлено відмінність природних штамів не тільки в вірулентності, а й значна різниця в тропизме до нервової, легеневої і ентеральної тканинам. Показано, що при серійному пасирування (37 ° С, 120 ч) нерозведеним вірусу НБ в КЕ продукується надмірна кількість ГА освіту "неінфекційних" частинок є, наслідком множинної інфекції клітин неінфекційний ГА формується в результаті інтерференції при дозріванні активного вірусу з вірусом неповним , інфекційність вірусу більш чутлива до термальної інактивації, ніж його ГА-активність.

Локалізація вірусу. Вірус локалізується в паренхіматозних органах, кістковому і головному мозку, м`язах, трахеальной слизу, товстому і тонкому кишечнику, міститься в різних виділеннях. В період вираженої клінічної картини хвороби в достатку виділяється в зовнішнє середовище з фекаліями, трахеальной слизом і повітрям, що видихається Вірус, як правило, можна виділити тільки на початку хвороби. Переболевшие птахи можуть довго бути вірусоносіями. В організмі не імунних птахів вірус НБ виявлявся через 24-48 год і далі протягом 10 днів у всіх органах і тканинах. У імунних або частково імунних птахів найбільш тривалий час (19 дн) вірус виділяли з залозистого шлунка, лімфоїдних утворень сліпої кишки, фабріціевой сумки і мозку. Оскільки жоден із зазначених органів не відрізнявся щодо тропізму вірусу, то в польовий діагностиці рекомендується досліджувати всі чотири органу. При наявності циркулюючих ATвірус іноді вдається виділити з мозку перехворіли птахів Показано, що вірулентні штами можуть безсимптомно персистувати в організмі імунних птахів протягом 70 дн. Немає залежності між титрами АІТІ ГА і ступенем виділення вірусу в зовнішнє середовище. Зі збільшенням тривалості вирусоносительства (вище 70 дн) вірулентність вихідних штамів вірусу знижується незалежно від початкового титру анти-ГА, проте латентна форма інфекції може вільно переходити в клінічно виражену. Було показано, що після зараження імунізованих птиці велогенним вірусом можливо носійство і виділення останнього протягом 14-17 днів, тобто поствакцинальний імунітет не виключає циркуляції дикого вело- або мезогенних вірусу. Можливість тривалої персистенції вирулентного вірусу в організмі вакцинованої птиці може обумовлювати виникнення вирусоносительства.

Вивчено in vitro зв`язування шт. V4 вірусу НБ з клітинами різних відділів травного тракту курчат. Виявилося, що ентероцита 12-палої, тонкої, повздошной, сліпої та прямої кишок пов`язували 97, 85, 99, 92 і 90% вірусу відповідно, в той же час до ентероцитів стравоходу, зобу і залозистого шлунка вірус не прикріплявся, тому і інфекційність супернатанта не змінювалася.

Антигенна активність. Всі форми НБ викликаються ідентичними в АГ-відношенні штамами і протікають з утворенням ВНА, анти-ГА і КСА У сироватці птахів AT з`являються через 6-10 днів після зараження, поки ще у хворої птиці проявляються клінічні ознаки хвороби. Найвищий титр їх відзначають через 3-4 тижні. Зниження титру AT зазвичай відбувається повільно і стає помітним через 3-4 міс, а через 8-12 міс AT вже не виявляються. Встановлено кореляцію між анти-ГА і ПА. Низький відсоток птахів (до 12) з ПА вказує на наявність в стаді вираженого імунітету проти НБ, а високий відсоток (більше 50) свідчить про персистентной інфекції.

Отримано окремо AT на глікопротеїн ГА-нейрамінідази (ГП-ГН) і на глікопротеїн злиття (ГП-С). Перші з них пригнічують ГА і нейрамінідазной активність вірусу НБ і гальмують його гемолітичну дію, ATна ГП-С не впливають на його перші дві активності, але пригнічують його гемолитическую активність і гальмують ефект вірусіндуцірсванного злиття клітин. Шт. 575, виділений від диких лебедів і королівських крячок в Канаді, мав унікальну здатність викликати утворення не тільки анти-ГА, але іAT, які блокують елюція вірусу з еритроцитів.

Експериментальна інфекція. Легко відтворюється на курей, курчат і індичат вірулентними штамами при будь-якому методі зараження. Вся заражена велогеннимі штамами птах, яка не має пасивних материнських AT, гине. Мезогенних штами (подібні вакцинному вірусу Н) викликають летальний результат у курчат до 45-60-сут віку. Серед дорослої птиці відхід досягає 25-30%. Спостерігають паралічі і парези. У курей-несучок несучість припиняється на 25-30-й день.

Лентогенние штами (Bl, F, La Sola, Бор / 74 / ВГНКИ) викликають у курчат слабку або інаппарантную форму хвороби. Навіть при интрацеребрально зараженні курчата НЕ гинуть, КЕ теж гинуть раніше 100 годин після введення мінімальної летальної дози.

Крім курей і курчат до експериментального зараження сприйнятливі перепела, горобці, тетерева, голуби. При парентеральному зараженііне які штами виявилися патогенними для морських свинок, котів, собак та інших ссавців. Інтраназально і интрацеребрально вдається заразити і золотистих хом`ячків. Питання про трансваріальной передачі вірусу НБ однозначно не вирішене. Однак факти останніх років свідчать про можливість такої передачі. Так, наприклад, у вмісті шлунка дуже молодих невакцинованих курчат були виявлені лентогенние штами вірусу. Останній виявлявся навіть у КЕ, незважаючи на присутність материнських AT. Поствакцинальні титри AT низькі і варіабельні у курчат, попередньо інфікованих вірусом НБ.

Культивування. Крім сприйнятливою птиці вірус культивується в КЕ при будь-якому способі зараження, на ізольованих ХАО, в культурі фібробластів КЕ, деяких первинних і перещеплюваних клітинах. Через 48г вірус (шт. R2B) накопичувався в значних кількостях в ХАО і в низьких титрах визначався в аллантоісной-амніотичної рідини. Якщо ембріони інкубують до 60 год, то вірус виходив з тканини мембран і накопичувався в екстра ембріональної рідини. У клітинах ВНК-21 М-білок вірусу НБ виявлявся в цитоплазмі з 5-го ч після інфікування.

Цитопатології зараженої культури клітин. Вірус розвивається в культурах клітин 18 первинних і 11 перевіваемих ліній, викликаючи цитологічні зміни. Репродукція його в культурі тканин супроводжується ущільненням цитоплазми клітин, появою в них вакуолей і вірусних частіц.Через 40 год в цитоплазмі деяких клітин виявляли безліч малих аморфних еозинофільних включень, оточених прозорою зоною. В одній клітці могло бути до 12 (і більше) таких включень. Через 2 дні в заражених культурах збільшувалася кількість клітин з пікнотіческім ядром, а через 7 та дивувалися всі клітини.

ГА властивості. Вірус аглютинативна еритроцити амфібій, рептилій, птахів, людини, мишей і морських свинок. Еритроцити ВРХ, овець, кіз, свиней і коней агглютинируются не всіма штамами вірусу. Різноманітність в агглютінабельності еритроцитів ВРХ залежить від іонної сили, концентрації солей і рН розчину. Інагглютінабельность еритроцитів певних видів пояснюється, ймовірно, швидкої елюція з них вірусу. Приблизно 105 інфекційних одиниць (ВД 5о) вірусу рівні 1 ГА.Некоторие штами вірусу втрачають ГА-активність при 56 ° С за 5 хв, зберігаючи інфекційні властивості, інші, навпаки, зберігають ГА-здатність після прогрівання при 56 ° С протягом 180 240 хв, а інфекційна активність їх втрачається через 90 хв Для окремих штамів НБ характерна певна температура, при якій вони втрачають ГА-активність. Це властивість можна використовувати для диференціації штамів. ГА лентогенного шт. В1 в інфікованих клітинах ХАО накопичуються до 12 год культивування в більш низьких титрах (1:16 - 1:32), ніж ГА велогенного (Т / 53) штаму (1:64 - 1: 128). Вірус НБ, вирощений в КЕ, складається з інфекційних і неінфекційних ГА частинок. У цих 2 типів частинок вивчені структурні білки, ГА і нейрамінідазной активності, поліпептидний склад жирних кислот в ліпідах мембрани. Фіксація еритроцитів курчат гаотеральдегідом не знижує їх агглютінабельності по відношенню до вірусу НБ. Фіксовані таким чином еритроцити можна використовувати в РДА і РГГА після зберігання при температурі 4 ° С протягом 2 міс. Велогенние штами відрізняються від лентогенних по ГА-властивостями. Диференціація зазначених збудників - обробка їх протягом 1 год азотної кислотою при рН 4 і температурі 37 ° С.

Нейрамінідазной активність. Виявлено зворотну кореляцію між нейромінідазной активністю і вірулентністю штамів вірусу. Вважають, що параметри ензиматичною активності можуть бути маркерами вірулентності вірусу in vivo.

Гемолітичні властивості. Всі штами вірусу володіють гемолітичною активністю по відношенню до еритроцитів морських свинок, коней і курей, яка не пов`язана з вірулентними властивостями і знаходиться в прямій залежності від ГА-титру вірусу. Однак є і протилежна думка. За гемолітичної активності штами вірусу НБ можна розділити на слабоактивними (Sи М) і високоактивні (Т, Н і В). На гемолитические властивості вірусу впливають концентрація солей, рН і температура середовища, вид еритроцитів. При 4 ° С вона різко знижується. Гемолітичні властивості вірусу можна інактивувати специфічної анти сироваткою і формаліном.

Токсичні властивості. Токсичність вірусу залежить від методу введення вірусу: интрацеребрально, інтраназально, внутрішньовенно. У кроликів, заражених в мозок, в перші 2 дн розвиваються паралічі, і під кінець 3 сут тварини гинуть. При внутрішньовенному зараженні кроликів вірус викликає пирогенную реакцію, можуть з`явитися лімфоцитопенія і лихоманка. У мишей при інтраназальному введенні розвивається летальна пневмонія, а після повторних інтраназальних введень -гепатізація легких. Після заморожування-відтавання віруссодержащейекстраембріональной рідини або обробки її in vitro гомологичной іммуносивороткі токсичні властивості вірусу зникають.

Інтерфероногенна властивості. Багато штамів, особливо шт. Н, -хороші індуктори інтерферону. Виділено ts-мутанти цього вірусу і вивчена їх здатність індукувати інтерферон в первинних клітинах КЕ. Показано, що 5% вірусного генома, пов`язаного з инфекционностью, необхідно для індукції інтерферону. Істотну роль в індукції інтерферону відіграє рання транскрипція (2-3 ч після зараження) генома вірусу. Здатність індукувати інтерферон у інтактних віріонів НБ, інактивованих р-пропив-лактоном від віріонів і деяких структурних компонентів порівнювали в тест-системі Р / 3 ML - інтерферон продукують клітин.

Вірулентні властивості. За вірулентним властивостям всі виділені і охарактеризовані штами вірусу НБ поділяються на велогенние (Т, Сато, Міадера і ін.), Мезогенних (Н, Комаров, Муктесвар, Роакін і ін.) І лентогенние (В 1, F, La Sola, Бор / 74 / ВГНКИ). Велогенние штами відрізняються від лентогенних за рівнем репродукції і спектру інвазивності. Вони накопичуються в органах хворих курчат (легені, селезінка, печінка, мозок) в концентрації 5,5 lg ЕЛД 5о / г, лентогенние ж штами (Bl, La Sota) в мозку не виявляються, а рівень накопичення в легенях і селезінці не перевищує 2 , 5 lg ЕЛД 50 / г .. ЦПА велогенних штамів зазвичай відповідає інфекціонностідля КЕ, тоді як лентогенние штами ЦПА не володіють.

За допомогою методу фінгерпрінт можна ідентифікувати високопатогенні штами вірусу, які мають дуже близьке АГ спорідненість, а також визначати кореляцію між наявністю специфічних олігонуклеотидів і патогенністю. Розроблено культурально-тканинний метод диференціація мезовелогенного і інших штамів вірусу НБ, заснованого на вивченні характеристики ЦПД штамів вірусу, їх інфекційних титрів в культурі клетокLSGFS-SF3. Лентогенние штами в цій культурі клітин продукуються в низькому титрі і ЦПД їх слабо виражене. Отримано також мої AT, придатні для штаммовие диференціації. Для диференціації лентогенних штамів вірусу НБ застосовують РГА- елюції. Ці штами можна розділити на дві групи: швидко (-24R) і повільно (+ 24R +) елюіруются. Крім того, використовують тест термо стабільності ГА і середню смертність заражених КЕ.

епізоотологічне характеристика.Джерела і шляхи передачі інфекції. Джерело інфекції - хвора птиця. Зараження відбувається при контакті хворої птиці зі здоровою, а також через інфіковану воду і харчові відходи. Особливо швидко інфекція поширюється аерогенним. Хвора птиця через 2 дні після зараження і за день до появи клінічних ознак хвороби виділяє вірус з повітрям, що видихається, під час кашлю. Поширення інфекції на великі відстані (по повітрю до 15 км) пов`язане з перевезенням птиці, тушок вимушено забитої птиці, інфікованої тари, яєць з неблагополучного господарства, а також незнешкодженої одягу, взуття. У яйцях, зібраних від хворої птиці, зародок при інкубації гине від вірусу.

Є дані про передачу вірусу через деяких паразитів, зокрема E.tenella, E. noeca-trix. Таку ж роль можуть грати кокцидии. Було доведено, що після зараження вірусом курчат, які до цього були інвазовано статевозрілими або розвиваються формами Ascaridae galli, вірус впроваджувався в паразитів і його можна було виділити. Особливу важливість має наявність вірусу в яйцях A.galli, в яких він може тривалий час зберігатися і передаватися сприйнятливим птахам. В Австралії проведена оцінка патогенності 45 ізолятів вірусу НБ, що циркулюють в даний час. Всі патогенні ізоляти передавалися шляхом контакту.

Спектр патогенності в природних умовах. У природних умовах вірус виділяли від домашніх різних видів (індички, цесарки, качки), синантропних (голуби, горобці, галки) і диких птахів. У 1979 р від папуг (KatakoeSulpurea) виділено велогенний штам (GND-1) вірусу НБ. У 1-5% випадків вірус виділяли з клоаки водоплавних птахів. У 1982 р від японського яструба-перепелятника (Accipiter Virgatus golans) виділено варіант вірусу НБ, що відрізняється температурочувствітельной в РГА- він викликав ГА тільки при 4 ° С, а не при 25 або 37 ° С В 1980 р в Бельгії виділено вірус від голубів, всі штами його виявилися лентогеннимі Висловлено припущення про те, що голуби - природні носії лентогенних штамів.

У літературі наведено випадки зараження людей вірусом НБ, які, головним чином, можуть бути при порушенні гігієни на підприємствах і індивідуальної гігієни персоналу. У хворих осіб розвивався кон`юнктівіт.Імеются відомості про епізоотологічних особливості та клінічній картині НБ серед голубів в деяких районах Судану в 1982 р Клінічно ця хвороба характеризувалася раптовим пригніченням, втратою апетиту, нервовими явищами, нездатністю літати. У ряді господарств летальність серед голубів досягала 100%. Виділений вірус не відрізнявся від прототипну штамів вірусу НБ. Протягом тисячу дев`ятсот вісімдесят чотири г.в Австрії різко зросла інфікованість голубів вірусом НБ. У 1990-1991 рр. при серологічному визначенні AT проти вірусу НБ у водоплавних (качок Ігус) за допомогою РГГА і ІФА показано, що AT в РГГА виявлені у 3,1% мускусних і 10% пекінських качок, по ІФА - у 20,3 і 24,8% відповідно. У 1970-1972 рр. в Голландії загинула велика кількість норок від менінгоенцефаліту. Причиною смертності був вірус НБ Виділений на КЕ, він мав низьку патогенністю для норок при інтрацеребральному введенні. Виявляється, тварини заражалися при поїданні потрухів інфікованої птиці, серед якої в цей час спостерігалася НБ. Описаний випадок гострого респіраторного захворювання у 3-міс дрохви хилитаючись в Таїф (Саудівська Аравія). З легких, селезінки і трахеї ураженої птиці був вперше виділений вірус НБ і вірус віспи птахів.

Клінічні
ознаки і патологоанатомічні зміни. при природному
Протягом інкубаційний період триває від 5 до 15 днів (в середньому 5-6 днів).
Симптоми хвороби досить різноманітні.
Описано чотири форми клінічного прояву хвороби. При першій велогенной
формі спостерігають пригнічення, слабкість, розлад функції органів дихання,
діарею з появою рідких зелених фекалій з домішкою крові, тремор,
опістстонус. Можливі паралічі лап і крил, а також загибель птиці без будь-яких
ознак. Смертність досягає 90%. Основний патологоанатомічний ознака -
геморрагическое ураження травного тракту. Вважають, що ця форма
хвороби викликається високопатогенними (велогеннимі) азіатськими штамами вірусу. Велогенная
вісцеротропная НБ з летальністю до 100% в 1966 - 1973гг. отримала епізоотичне
поширення, особливо в Європі і США.Вторая форма
хвороби характеризується ураженням, головним чином, органів дихання (кашель,
задуха) і нервової системи. Гине від 10 до 50% хворої птиці. серед курчат
загибель досягає 90%. Пневмоенцефаліт з летальністю до 100% був широко поширений
в Західній півкулі в 1940-1950гг., в даний час реєструється дуже
рідко. Стара птах гине рідко. Деякі мезогенних штами, що викликають цю
форму хвороби, до сих пір використовуються в якості вакцинних (шт. Н, Комаров і
ін) Третє найбільш
легку форму хвороби викликають лентогенние штами вірусу. спостерігають
незначні зміни респіраторного ігермінатівного трактів (оофоріти і
сальпінгіти). Несучість припиняється на 7-22-й день, знижується апетит,
легкий кашель можна почути вночі. Четверта - асимптоматична форма
протікає без ознак і захворювання часто визначається серологічно або
виділенням віруса.Прі розтині
трупів птиці, полеглої при гострому перебігу хвороби, виявляють запалення
слизових оболонок носа і ротової порожнини, смугасті крововиливи на слизовій
оболонці стравоходу, зоб переповнений злежатися або рідкими кормовими масами,
слизова оболонка шлунка покрита слизом. На кордоні залозистого і м`язового
відділів шлунка видно крововиливи у вигляді паска. У тонкому кишечнику найбільш
характерні вогнища некрозу і ерозії навколо пеєрових бляшок, в товстому -
везикулярне папули, ерозії і виразки на всьому протязі слизової
оболонки. Селезінка в стані атрофії. На слизової оболонки ротової порожнини, стравоходу
і пілоруса - виразки, епітелій ліберкюнових залоз дегенерувати і слущить,
навколо розширених і некротизованих крипт у слизовій оболонці тонкого
кишечника скупчення слизового секрету і випотівання нейтрофілів. атрофія і
некроз виявлені в селезінці, печінці, солітарних лімфовузлах і тимусі.
Зміни в печінці непостійні. Селезінка уражається досить часто. вона
збільшена, бліда, плямиста. Яєчники гіперемійовані, лицьові клітини
збільшені, іноді розірвані, і желточная маса знаходиться в черевній порожнині. В
серцевому м`язі помітні крововиливи, в порожнині серцевої сорочки ексудат.
Слизові оболонки гортані і трахеї катарально запалені. Характерно ураження кишечника:
гострий катар, різка гіперемія, крововиливи, наявність фібринозно-некротичних
ділянок. Останні часто зустрічаються в дванадцятипалої і тонкої кишках.
Іноді уражається весь кишечник. Точкові і плямисті крововиливи
виявляють у 50-70 і навіть 90% хворих курей в дванадцятипалої, прямий і
сліпий кишках. Зміни в печінці носять непостійний характер. У окремих
курчат вона збільшена, повнокровна, темно-вишневого кольору, іноді з одиничними
точковими геморагіями під капсулою. Жовчний міхур наповнений жовчю темного
кольору, а на слизовій оболонці іноді відзначають точкові крововиливи і
некротичні вогнища. Нирки повнокровні і набряклі. Селезінка нормальної величини
або зменшена в розмірі. Слизові носової порожнини, гортані і трахеї гіперемійовані,
з дрібними крапковими крововиливами, нерідко з дифтерійними накладеннями.
Легкі у більшості курей бувають повітряними, світло-рожевого кольору, іноді з
явищами застійної гіперемії і набряку. В перикарді і грудобрюшной порожнини
невелика кількість рідини світло-солом`яного кольору. Серцевий м`яз темного
кольору, в`яла, повнокровна, іноді з дрібними крапковими крововиливами в
області епікардіального жиру. У мозку явища набряку і гіперемії, в окремих
випадках точкові крововиливи в твердій і м`якій мозкових оболонках і речовині
мозку.гістологічні
зміни. Постійно виявляють ураження в залозистому шлунку і по всій довжині
кишкової трубки. Слизова оболонка різко потовщена за рахунок набряку і клітинної
інфільтрації і знаходиться в стані вираженого десквамативного катару.
Покривний епітелій і епітелій крипт піддаються дистрофії, некрозу і злущування
в просвіт. Крипти у формі витягнутих мешковидних бесстуктурних утворень,
забарвлених в сіро-синюватий колір. Сполучнотканинні волокна подслизистого
шару сильно розсунуті в результаті запального набряку та інфільтрації
лімфоцитами та іншими клітинними елементами. Закономірно для НБ - некротичні
ураження товстого кишечника. Відзначають також сильне розвиток клітинно-проліферативних
реакцій в ЦНС і внутрішніх органах, по ходу капілярів і дрібних судин, а в
речовині мозку з боку клітин мікроглії -освіту гліозних вузликів.
Крім того, зустрічаються тигролізу, вакуолізація цитоплазми і ядра, хроматоліз і
загибель нейронів. В селезінці, печінці, нирках і шлунково-кишкового тракту проліферативні явища
навколо судин, в междольковой, межканальцевой і подепітеліальной
сполучної тканини. В селезінці різка гіперплазія фолікулів, потовщення і
фібриноїдний некроз стінок судин з розвитком околоконцевих артерій вогнищ
крупноклеточной проліферації з некрозами в центрі їх і відкладенням фібрину. В
нирках - ознаки некробіозу епітелію канальців і картина важкого нефроза. В
легких - явища застійної гіперемії і набряку і редконекротіческая пневмонія.
Описана картина розтину і гістологічні зміни характерні для класичного
прояви НБ при зараженні велогеннимі штамами. З численних спостережень
встановлено, що протягом інфекції з ураженням нервової системи або
респіраторного тракту без гострого септичного процесу частіше викликається
вірусами з природно ослабленою вірулентністю.Патогенез. Вірус, проникаючи в організм, розмножується
в клітинах ендотелію, в результаті чого клітини кровоносних судин
розрихлюються, порушується їх порізно і в них розвиваються
запально-некротичні процеси. Через 24-36ч. вірус локалізується в паренхіматозних
органах, кістковому і головному мозку, кишечнику і м`язах, викликаючи поряд з
розладом гемодинаміки тяжкі некрози-дистрофічні зміни.діагноз. При характерному перебігу хвороби
постановка діагнозу не представляє складності. При спалаху хвороби на тлі
пасивного або поствакцинального імунітету, а тим більше в стаціонарно
неблагополучному господарстві поставити діагноз буває надзвичайно важко. В цих
випадках ретельно вивчають епізоотичну ситуацію, клінічну і
патологоанатомічну картину. Вирішальне значення мають лабораторні
дослідження - виділення вірусу на КЕ, його індикація та ідентифікація в РДА -
РГГА, визначення вірулентності вірусу на КЕ і курчатах, а також виявлення AT
в сироватці перехворіли або вакцинованих птахів в РГГА.Виділення вірусу. Вірус, в залежності від його тропізму
можна виділити з головного і кісткового мозку, трахеї, кишечника, селезінки,
легенях, печінці. Для дослідження рекомендується брати голову, легені, трахею і
селезінку від щойно полеглих або вимушено убитих птахів. вірус вдається
виділити тільки в період спалаху хвороби. Через 15 днів. виділити його звичайними
методами, як правило, не вдається. Тому патологічний матеріал необхідно
брати на початку спалаху (в перші 3-5дн.) і направляти в лабораторію в термосі
з льодом. Внутрішні органи можна поміщати в стерильний 50% -ний розчин гліцерину
на дистильованої воді. Змиви з трахеї і клоаки краще консервувати на
холоді або при температурі не вище 4 ° С. Мазки-відбитки досліджують методом ФА,
зрізи - за допомогою ЕМ або ІЕМ, а суспензію - в РДА. Це дозволить виявити
специфічний АГ (вірус) і ГА-агент протягом 3-5ч, визначити спрямованість
подальших досліджень.Зараження КЕ. Ембріони 9-11-дн віку заражають по 0,2
мл., не менше 10 КЕ на кожен матеріал, в аллантоісную порожнину загальноприйнятим
методом і інкубують 72 год. при 37,5 ° С (загиблих в перші 24 год. ембріон
враховують) .Якщо через 72 год. немає загиблих КЕ, то 5 з партії заражених вбивають,
залишаючи їх при 4 ° С на ніч. Решта 5 КЕ инкубируют до 120ч. і потім
вбивають. Аллантоісную рідина від загиблих і живих КЕ перевіряють на ГА в РДА з
курячими еритроцитами (1-5% -ная суспензія). Зазвичай велогенние штами вірусу
викликають загибель КЕ вже через 32-60ч. після зараження, мезогенних - через
60-90, а лентогенние - через 100год. и більше. Іноді при першому пасажі НЕ
вдається виділити вірус, тому необхідно провести не менше 3-х
"Сліпих" пасажів. З огляду на, що в вакцініруемих стадах можна
виділити і вакцинний вірус (шт. Н, La Sota, Бор 74 / ВГНКИ і ін.), другим етапом
дослідження має бути визначення патогенності виділеного ізоляту. першим
орієнтиром можуть служити дані РДА. Зазвичай польові ізоляти мають низьку
ГА-активністю, проявляючи її в розведеннях 1 16 - 1.128, тоді як вакцинні
штами, навпаки, проявляють високий ГА-титр - 1-256 - 1-2048.Ненадежним
виявився метод виділення вірусу від заражених імунних курей: чим вище імунітет
у несучок, тим менше ймовірності виділення вірусу з їх ембріонів. при
дослідженні великої кількості польових зразків на виділення вірусу НБ можна
використовувати фрагменти ХАО, пов`язані з яєчною шкаралупою. Для цього фрагменти
ХАО розміром 0,6-1,0 см2 культивують в середовищі Голка. ефективність виділення
вірусу 97%. При внесенні вірусу в середу культивування, або безпосередньо на
ХАО, КЕ отримані збігаються результати.Зараженіе
культури клітин. Виділення вірусу в культурі клітин здійснюється рідко, так
як культуральний вірус по ГА-активності значно поступається ембріональному.
Однак в тих випадках, коли в лабораторії можна отримати культуру фібробластів
КЕ і фахівці володіють цим методом, його можна застосовувати для виділення і
ідентифікації вірусу. Приготування вірусної суспензії, вирощування і
зараження культури клітин курячих фібробластів виробляють загальноприйнятим методом.
Можна використовувати перещеплюваних лінії ВНК-21і Нер-2.В зараженої
культурі фібробластів КЕ вірус НБ через 48-60ч. викликає ЦПД, специфічність
яких підтверджується реакцією гемадсорбції з еритроцитами курей. З вірус-яка містить
культуральної рідиною може бути поставлена РДА щодо еритроцитів
крові курей. Зазвичай при первинному виділенні ГА-титр культурального вірусу не перевищує
1: 32 М28. Відсутність або низькі титри ГА вірусу в першому пасажі на культурі
тканини, не дають підстави виключити НБ.Зараження птахів. Якщо КЕ під руками немає, вірус можна
виділити на неиммунной до НБ птиці. Для цього випробуваний матеріал Г10 (0,5 мл.) Внутрішньом`язово
інокуліруют курчатам у віці 2-4 міс. За інфікованою птицею спостерігають
10-12 дн. При появі характерних для хвороби симптомів птахів в агональному
стані вбивають і беруть проби головного мозку і селезінки, які
використовують для зараження КЕ і імунологічної проби (для одночасного
зараження птахів імунної та неімунного груп).Титрування вірусу. Зазвичай проводять на КЕ, культурах клітин по
загальноприйнятою методикою і на 6-10 тижнів. курчатах. Доза інокуляції вірусу для курчат
0,5 мл (внутрішньом`язово або внутрішньовенно). Термін спостереження 15 дн.Індикація вірусу. Експрес-методи виявлення антигену вірусу
НБ. Через 24 год. Вінфіцірованних культурах клітин (шт. Н) спостерігають появу
багатоядерних симпластов і цитоплазматичних еозинофільних включень
неправильної глибчатого форми. Через 48 годин після зараження цитоплазма буває
нафарширована тільцями-включеннями. В ядрах змін не відзначалося. розроблено
високочутливий авидин-біотіновий ІФА. В даному тесті застосовують мон АТ до вірусу
НБ, очищені і мічені біотином. Тест характеризується простотою виконання і
короткими термінами (3-4 ч.) отримання результатів. Непрямий точковий варіант ІФА
є швидким, легким, специфічним методом виявлення вірусу в змивах з
різних органов.Для
ідентифікації РНК вірусу НБ користуються експрес-методом ПЛР, амплифицируют
ділянку довжиною 238 п.н. в гені білка злиття F з використанням в якості
праймерів нуклеотидів, що фланкують последовательность.В організмі
птиці, зараженої вірусом НБ, в процесі тривалого контакту з вірусом
еритроцити втрачають здатність ГА (стають інаглютінабельнимі). щоб побічно
довести присутність вірусу в організмі, від досліджуваної птиці беруть 0,04 мл
крові в формалінізірованую (0,1% -ную) вируссодержащую аллантоісную рідина,
вірус повинен володіти високою агглютинируют активністю. Якщо на склі
настає гемагглютинация, це свідчить про відсутність в досліджуваній
краплі крові вірусу НБ. Облік реакції ведуть через кілька секунд. метод
застосуємо для виявлення патогенного вірусу в вакцинувати стаді, так як
вакцинні штами лентогенной групи інагглютінабельності еритроцитів НЕ
викликають.РДА. Використовують з метою орієнтовного визначення присутності
вірусу в досліджуваному матеріалі і для його титрування. ГА вірусу входять до складу
вірусної частки (віріона) і можуть міститися в інфікованих аллантоісной і
амніотичної рідинах, оболонках і органах КЕ, легенів, печінки, нирках і
селезінці загиблої птиці, в рідкій і клітинної фракціях тканинних культур.
Можна брати еритроцити крові курей, морської свинки, коні, людини та ін. Різні
види вірусів і навіть шт. одного і того ж вірусу можуть відрізнятися один від одного
здатністю агглютинировать еритроцити зазначених тварин. Спектр ГА служить
характеристикою біологічної активності вірусу і штамів. Наприклад, більшість
шт. вірусу НБ не викликає ГА еритроцитів коня, чим відрізняється від вірусу
класичної чуми птахів, який здатний ГА їх у високих розведеннях.
Запропоновано експрес-діагностика атипових форм НБ кровекапельной реакцією
гемаглютинації (ККРА). Простота постановки її, поєднання досліджень на НБ і
пуллороз-тиф, дозволяють включити її в технологічний процес ветобработкі
птиці.Серологічна ідентифікація. РГГА. Основний, високоспецифічний і
простий у виконанні метод ідентифікації вірусу НБ. Для постановки необхідно
мати еталонні специфічні сироватки до вірусу і виділений на КЕ вірус
(Аллантоісная рідина) РГГА ставлять загальноприйнятим методом в макро- і
мікроваріант. Ідентифікацію вірусу вважають завершеною, якщо еталонна
специфічна сироватка гальмує ГА-активність вірусу в межах цілого або
1 / 2-1 / 8 титру з гомологічним еталонним АГ. Для швидкої ідентифікації
виділеного вірусу рекомендують наступний метод: на предметне скло наносять
краплі аллантоісной рідини і 1% -ву суспензію курячих еритроцитів. потім
ставлять пробу на нейтралізацію ГА-активності. Для цього на предметне скло
наносять краплю тієї ж аллантоісной рідини, краплю еталонної специфічної
сироватки і гарненько перемішують. Якщо аглютинації еритроцитів немає, значить
виділений вірус є вірусом НБ.Приготування гіперімунна сироваток. 5-8-міс курей з тітраміанті-ГА поствакцинального
імунітету проти НБ 1: 4-1: 64 гіперіммунізіруют вірус-вакцинами з шт. В1, La Sola, Н. Перше введення роблять з ад`ювантом (автоклавуватися
суміш ланоліну з вазеліном у співвідношенні 1: 1,5). На 1 мл. суміші додають 5 мл
вакцинного вірусу. Суміш розтирають у ступці і поміщають у водяну баню на 30 хв.
при температурі 56 ° С.1-й раз вакцину
вводять з ад`ювантом в обсязі 1 мл. внутрішньом`язово, 2-й раз - через 3 дні без
ад`юванта, 3-й раз ще через 3 дні без ад`юванта. Через 10 днів. перевіряють активність
гіперімунна сироваток. Титр їх зазвичай становить 1: 6144-1 12288.РН на КЕ. Використовують для ідентифікації вірусу рідко, так як вона
трудомістка і тривала. Реакцію використовують в спірних ситуаціях. РН ставлять загальноприйнятим
методом зазвичай в варіанті розведення вірусу і постійної дози сироватки.
Реакцію вважають позитивною при індексі нейтралізації gt; 21g.РСК. У діагностичній практиці при НБ використовують рідко. запропоновано
РСК як швидкий і дешевий метод диференціації штамів вірусу НБ по вірулентності.РИФ. Метод заснований на застосуванні роду мінсульфохлоріда для кон`югації
імунної сироватки до вірусу з метою ідентифікації вірусного АГ в уражених
клітинах полеглих і убитих птахів. Застосування цього барвника найбільш прийнятно і
зручно завдяки яскравому оранжево-червоному світіння АГ. ФИТЦ-кон`югати
(Флюоресцеінізотіоціанат) менш придатні. Для виявлення специфічного АГ
застосовують гомологічні РСХ-кон`югати загальноприйнятим методом. У більшості
випадків АГ виявляється в ядрах клітин білої крові (лімфоцитах, моноцитах,
псевдоеозінофілах і еозинофілів) або уражених клітин зазначених органів у вигляді
яскравою флюоресценції оранжево-червоного кольору. У контрольних препаратах,
оброблених тими ж гомологічними кон`югатами, подібного свічення не
спостерігається, лише в деяких випадках виявляється точкове жовто-помаранчеве свічення
в цитоплазмі юних еозинофілів. Встановлено, що вірусний АГ в заражених
культурах клітин (ФЕК іВНК-21) виявляється, починаючи з 4 год. (для велогенних
штамів) і з 6 ч (для лентогенних штамів), до 10-12год. світіння АГ відзначали
тільки в цитоплазмі, а через 20 год. - в цитоплазмі і ядрах клітин.РИГА. У ВНІВІП розроблена методика отримання висушених стандартних
високочутливих і специфічних еритроцитарних тест-препаратів з AT до
вірусу НБ для експрес-діагностики. Зазначений еритроцитарний діагностикум
дозволяє виявити вірус в екскретів органів і тканин.ІФА. Методом ІФА вірусний АГ виявляють в ранні терміни після зараження
до появи ЦП Д. Через 12год. після зараження видно поодинокі АГ-містять
клітини.Ідентифікація за допомогою монАТ. Досліджено різні штами вірусу і ізоляти
НБ на гомологичное спорідненість до монАТ. В результаті тестування 40 ізолятів і
штамів з використанням набору з 9 монАТ виявлено 8 груп. Віруси кожної групи
володіли не тільки загальними АГ-властивостями, але і однаковими епізоотичними рисами
МонАТ до ГА і глікопротеїну F, рекомендовано використовувати для визначення патогенності
і біологічної характеристики штамів, що циркулюють в стадах вакцинованих і
невакцинованих птахів. Вони можуть бути використані для ідентифікації польових ізолятів,
АГ-родинних шт. La Sota і В1, швидкої диференціації цих
вакцинних штамів від вірулентних польових ізолятів.Метод картування олігонуклеотидів. Цим методом досліджено біохімічний
склад кількох штамів вірусу НБ, виділених в штатах Каліфорнія, Техас і
Флорида, це дозволило легко диференціювати штами один від одного. частина
штамів виявилися ідентичними. Вважають, що метод олігонуклеотидних
картування може бути ефективно використаний з метою оцінки епізоотичної
ситуації.Визначення вірулентності виділеного
вірусу. Крім серологічної
ідентифікації часто виникає необхідність визначення вірулентності
виділеного ізоляту. Це важливо, коли виникає підозра, що виділений
збудник є штамом, що застосовуються для масової вакцинації. ступінь
вірулентності можна визначити наступними методамі.Метод Хенсона -
визначення індексу внутрішньомозкової вірулентності. Досліджуваним матеріалом в
розведенні 1:10 заражають интрацеребрально в дозі по 0,05 мл 10 1-дн курчат,
отриманих від невакцинованих проти НБ курей. Час спостереження 8 дн. всі загиблі
курчата вважаються спеціфіческімі- їх суму множать на коефіцієнт 2. Всі
курчата, що проявили клінічні ознаки, теж вважаються спеціфіческімі- їх
суму множать на коефіцієнт 1. Індекс интрацеребрально патогенності
обчислюють шляхом ділення суми балів на 80 (число спостережень за 10 курчатами в
Протягом 8 днів). Для лентогенних штамів індекс до 0,2, для велогенних штамів -
більше 1,5. Недоліком даної методики є - постійний період спостереження
- 8 дн.Метод
визначення середнього часу загибелі 10-дн. ембріонів, викликаний мінімальний
летальною дозою (СВГ / МЛД). Для цього готують серію 10-кратних розведень досліджуваного
вірусу від 10 -1 до 10-10, п`ять з них (10-1, 10 -7, 10 8, 10 9, 10 -10
використовують для зараження 10-дн КЕ в аллантоісную порожнину в обсязі по 0,1 мл.
Кожним з цих розведенні інокуліруют по 10 КЕ: по 5 заражають в 8ч. ранку і в 16ч.
(В загальному заражають 50 ембріонів) та інкубують їх при 37 ° С. Спостерігають за ними 2
рази в день через 8 ч протягом 120 ч. Час загибелі кожного загиблого ембріона
реєструють. Мінімальною летальною дозою вважають найбільше розведення
вірусу, що викликає загибель всіх інокульованої ембріонів. Середній час загибелі
знаходять шляхом ділення суми годин загибелі всіх ембріонів, викликаної мінімальної
летальною дозою, на число ембріонів: середній час загибелі до 60 год - велогенние
штамми- середній час загибелі від 61 до 90 год - мезогенних штамми- середній час
загибелі від 90 і більше 100 ч - лентогенние штами. Однак методи ці
дорогі і вимагають багато часу - необхідно затратити щонайменше 7дн.
для того, щоб диференціювати дикі штами від вакцинних.РСК. Швидкий і дешевий спосіб диференціації штамів. діагноз
ставлять протягом 3дн. після отримання проб. Найслабше зв`язування комплементу
викликають велогенние дикі штами, найсильніше - лентогенние (наприклад La Sota), в межах між сильними і слабкими -
мезогенних. Крім того, вірулентні штами менш антигенів, ніж вакцинні, в
щодо індукції синтезу КСА у морських свинок. Найбільшу виразну диференціацію
дає сироватка морських свинок, імунізованих штамом Хітчнера.Біопроба.   Починаючи з 1972 р в США, а потім і в інших
країнах були виділені штами з дуже високою вірулентністю. Їх називають штамами
WND (вісцеро-тропний штами НБ). Для ідентифікації проводиться биопроба на
сприйнятливих курчатах у віці не менше 6 тижнів. Курчат заражають в клоаку. кілька
особин заражають в око, вносячи туди краплю вірусу. За птахами наблюдают10 дн.
Якщо протягом цього періоду жоден курча не гине, вважають, що штам
не відноситься до WND. Якщо ж птиці захворіють і загинуть протягом 10 дн., Виробляють
розтин. У США прийнято таку оцінка інтенсивності змін (в балах):
точні крововиливу або некротичні зміни в трахеї - 25- точкові
крововиливи або некротичні зміни в трахеї і супутня їм набряклість трахеї і
в області входу в грудну клітку
- 100 точкові крововиливи або некротичні зміни в зобі - 100 некроз
і виразка залоз сліпої кишки і пеєрових бляшок - 100 точкові крововиливи
або некротичні зміни слизової оболонки клоаки - 10 запалення очеревини
в області яєчника - 10 точкові крововиливи в інших місцях - 10.
Діагностика VVND вважається обгрунтованою, якщо загальне число балів досягає 150
або більше.Серодиагностика і ретроспективна
діагностика. критерієм,
що дозволяє судити про персистенції вирулентного вірусу в стаді, є титри
AT в сироватці крові птахів. Дослідження проводять тільки з парними сироватками,
отриманими від одних і тих же птахів (або на одній і тій же групі птахів). першу
пробу беруть перед вакцинацією (або спочатку хвороби), другу - на 15-20-й день,
наступні - в будь-який час (зазвичай 1 раз на місяць).РГГА. Реакцію ставлять з 4 Гаї в макро- і мікроваріант за загальноприйнятою
методикою. Результати вважають позитивними, якщо різниця в титрах 1-й і 2-й
сироваток становить не менше 3-х розведенні. Підвищення числа позитивно
реагують в РГГА між двома дослідженнями свідчить про поширення
інфекції в стаді. Постінфекційної AT зазвичай бувають в титрі 10lg і більш і
встановлюються протягом тривалого часу, що вказує на
що проходить або минулий інфекцію. Виявлення в стаді птиці анти-ГА в розведенні
сироватки крові 1: 1024 - 1: 2048 через 12-25 та після застосування живих
вирусвакциной не є сигналом про неблагополуччя його відносно НБ, навпаки,
це свідчить про високу реакції птиці на вакцину. Але якщо через 4-5 міс.
після вакцинації в стаді будуть виявлені титри AT 1: 2048 або нерівні титри,
тобто, коли у частини проб крові (10-15%) їх немає або вони не перевищують 1 2 - 1.4,
а в іншій частині (14-20%) складають 1: 1024 - 1: 2048 і вище, то стадо треба вважати
мали контакт з вірулентним вірусом. Для визначення активності
епізоотичного процесу птахів через 2 тижні обстежують повторно. виявлення
високих титрів AT (1: 4096 і вище) свідчить про загострення епізоотичної
ситуації. Для серологічного контролю з кожного пташника беруть по 25 проб
крові. Кратність досліджень визначається епізоотичною ситуацією. AT
виявляються не тільки в сироватці крові. Велика кількість їх міститься, наприклад,
в жовтку яєць імунізованих птахів. Цим шляхом відбувається передача пасивної
резистентності потомству. Виявлення AT в жовтку яєць, отриманих від вакцинованих
курей, на думку ряду авторів, більш вірогідно для визначення стану резистентності
поголів`я птахів. Готують екстракт з жовтка: в пробірку наливають 1,5 мл. яєчного
жовтка і 6мл. фізіологічного розчину і ретельно перемешівают- додають 2 мл.
діхлоретілена і 1 мл ефіру. Вміст ретельно змішують струшуванням.
Залишають суміш при 37 ° С до наступного дня, після чого центрифугують
Протягом 10 хв при 1,000 хв -1. Фракція діхлоретілена знаходиться внизу на дні
пробірки, над нею розташована смуга жиру. Злегка каламутну надосадову рідину
(Вона відповідає розведенню 1.5 жовтка яєць) відсмоктують піпеткою і використовують
в РГГА. Простіший метод полягає в наступному: жовток відокремлюють від білка і
1 мл. його розводять 2 мл. фосфатного буфера з рН 7,2. отриману суміш
гомогенизируют, потім центрифугують 15 хв. при 1,000 хв. -1. Для РГГА беруть
надосадову рідину між самим верхнім шаром і осілими частинками жовтка.
Титри AT в жовтку відповідають змісту їх в сироватці крові курей. вважають,
що для визначення імунного статусу стада курей до НБ значно простіше
досліджувати AT в яєчних жовтках, ніж в сироватці крові. Такий підхід
економічний, виключає стреси і небезпека поширення хвороби при взятті
крові. Досліджуючи жовток, можна визначити час первинної імунізації курчат,
виведених з аналізованої партії яєць. Титр пасивних AT в постнатальний
період за 4,5 дня знижується на 1 log 2. Так, при вихідному титрі AT 7 log до 18
дню він зменшується до 3 log 2, і до 5 log 2 до 9 дня. Надійний імунну відповідь
буде отримано у 80-100% птахів при вакцинації курчат в зазначеному віці per
os, інтраназально або аерозольно. Результати дослідження жовтка і парних
сироваток курей дозволяють судити про рівень сероконверсії і за ним визначати
напруженість поствакцинального імунітету. Чотириразове і більше збільшення
анти-ГА свідчить про циркуляцію епізоотичного вірусу. аналогічне
висновок роблять за зростанням індексу нейтралізації в 50-100 разів по
порівняно з початковими даннимі.Ставіть діагноз
по сероконверсии при впровадженні польового вірусу в стадо імунної птиці важко
без виділення вірусу і визначення його вірулентності на курчатах. можна тільки
припускати, що птах мала контакт з польовим штамом.РРГ. Ця реакція (РРГ) отримала широке застосування і високу оцінку
при багатьох параміксовірусних інфекціях. У дослідах з вірусом НБ показані лінійна
залежність діаметра зони гемолізу від концентрації AT і повна кореляція результатів
РРГ і РГГА. Так, при титрах в РГГА 1: 16-1: 32 діаметр зони гемолізу становив 6-7 мм, а при 1:64 і 1.1024 -
7,5 ± 0,3 і 9,5 ± 0,5 мм.
відповідно. При повторних дослідженнях одних і тих же сироваток
розбіжність показників не перевищувало 0,5
мм.ELISA. Численні дані зарубіжних дослідників свідчать
про високу чутливість, специфічність цього методу і кореляції між
титрами AT в РГГА і ELISA. Розроблено набір для скринінгу сироватки птахів на
присутність AT до НБ Титри в ELISA вище, ніж в РГГА і показують високий ступінь
кореляції. При дослідженні сироваток крові від вакцинованих птахів титр AT в
ELISA був в 2-4 вище, ніж в РГГА. AT до вірусу в ELISAі РГГА виявляються в 98, і
91,7% відповідно, коефіцієнт кореляції дорівнює 0-85. Однак ELISA
відрізняється більшою чутливістю. На підставі реактивності з монАТ штами
вірусу НБ розбиті на 5 груп. Для постановки реакцій ELISA і РЗГА при
виявленні AT до вірусу НБ доцільно використовувати хлороформний екстракт.Диференціальна діагностика. НБ слід диференціювати від ДБЖ,
грипу, ПМВ-2, ІЛТ і мікоплазмозу птахів. Для лабораторної діагностики грипу
птахів, ІБ і НБ використовують діагностикуми біофабричного виробництва. диференціація
вірусів грипу, які налічують 14 підтипів, і парамиксовирусов, що включають 9
серотипів, можлива тільки в лабораторії. Особливу увагу слід зосередити
на епізоотологічний моніторинг при цих хворобах, дослідженні парних
сироваток і періодичному лабораторному аналізі патматеріалу.імунітет. Природно перехворіла або
вакцинована птах набуває імунітет, тривалість і напруженість
якого залежить від віку птиці, біологічних властивостей вірусу і методу
введення його в організм.Для
специфічної профілактики застосовують інактивовані і живі вакцини.
Кількість перших останнім часом значно скорочувалася. Однак одностороння
орієнтація на живі вакцини різного ступеня аттенуации і в ряді випадків
небажані наслідки їх застосування змусили дослідників і практичних
фахівців знову повернутися до інактивованих препаратів, правда, більш сучасним.Застосування живих вакцин. Асортимент живих вакцин, що застосовуються в
Нині досить широкий: Н, В, F, FR, Комаров, Roakin, Ла Сота,
Банківський, Муктесвар, Міннесота, Бургас, Нью-Джерсі, Нью-Йорк, Накарелла,
К, ГАМІР, V4 і ін. Серед вакцинних лентогенних штамів вірусу НБ відомі - В,
NDP, LZ58 і Clone 30, Ulster 2C.В 1 989 г.в Австралії виділено шт. N4,
який характеризується повною авірулентние для птиці і активним поширенням
його серед птахів (високою контагіозністю). Вірус викликає імунітет при введенні
ІНТРАОКУЛЯРНОЇ, внутрішньом`язово і аерозольно. Він персистирует в організмі прищепленої
птиці до 2 років. У підсадженої не щеплені птиці до вакцинованої протягом 80дн.
виявлялися AT. Незважаючи на низькі титри (нижче 3 Iog2), прищеплена птах
володіла стійкістю до зараження вірулентним вірусом, що свідчить про
розвитку місцевого секреторного або клітинно-опосередкованого імунітету
безвисокіх титрів гуморальних AT.Пероральная
вакцинація шт. У4 (Австрія) стимулює лімфоїдні тканини кишкового тракту, що
індукує секреторні імуноглобуліни і забезпечує захист навіть при низькому
рівні циркуляторних гуморальних AT. Шт.V4, заданий з питною водою або
кормом, після вакцинації виділяється в навколишнє середовище. На думку авторів, пероральна
вакцинація цим штамом може дозволити ряд проблем профілактики НБ в невеликих
фермерських господарствах. Пилоподібна вакцина з шт. La-Sota розроблена під
ВНІІВВіМ. В основі технології виготовлення використаний метод сушки суміші
віруссодержащего матеріалу з наповнювачем. Вакцина забезпечує високий
імунологічний ефект і практично не має реактогенностью в широкому
діапазоні доз, має виражену імуногенність для курчат 14-16 тижнів віку в
благополучному і стаціонарно неблагополучному стаді птіц.В ВГНКИ ветпрепаратів
проведені дослідження щодо вдосконалення методів контролю імуногенності
вакцин проти НБ. Встановлений мінімальний захисний титр ан-ти-ГА 3 Iog2 і
більше, давав цілком об`єктивну інформацію про імуногенності вакцини. для
виключення похибок в методику була включена референс-вакцина НБ, що дозволяє
правильно інтерпретувати отримані результати і більш диференційовано
підходити до оцінки цього показника у серійно виробленого препарату.
Референс-серії готують у ВГНКИ, контролюють на відповідність закладеним в ТУ
параметрам і поставляють на біопредпріятія. Нова методика передбачає
10-кратний запас імуногенності і обов`язкове відповідність параметрам
референс-серій не менше ніж на 80%. Експериментально визначені імунізують
дози (НМД), що забезпечують абсолютний захист птиці від 1000 ЛД50 вирулентного
вірусу (ІМД90), рівні для шт. La Sota / 6,7 lg ЕІД50, для шт.
Бор / 74 ВГНКИ - 6 lg ЕІД50 при інтраназальному применениии 7,7 і 7,0 lg ЕІД50
відповідно при ентеральному застосуванні. Вони виявилися значно вище, ніж
у випадках застосування серій вакцин з мінімально допустимої по ТУ активністю
(8,0 lg ЕІД5о / см3). У зв`язку з цим мінімально допустима інфекційна
активність препаратів збільшена до 9 lg ЕІД50 /см3.В СНД широко застосовують
сухі вирусвакциной з шт. Н, Bl, La Sota, Бор / 74 / ВГНКИ. У профілактиці
НБ важливою є розробка оптимальної схеми імунізації птиці. Найбільш відповідний
вік для першої вакцинації - 10-14-й день, а для ревакцинації - 5-6 тижнів.
Кращі результати отримані при аерозольній вакцинації в 10-дн., 5 и8 -нед.
віці. У індичат ускладнення після застосування живої вакцини проти НБ В2-3
тижнів. віці пов`язують з придушенням вакцинним вірусом фагоцітарнойа ктівності
альвеолярнихмакрофагів. Щоб уникнути цього запропонована більш раціональна
схема імунізації індичат. У перший день життя їм вводять підшкірно інактивовану
вакцину в дозі 0,1 мл, а через 2 тижні. аерозольно вакцинують живою вакциною з
шт. В 1. Така вакцинація забезпечує тривалий імунітет. Високий рівень
поствакцинального імунітету у матерів не перешкоджав імунізації добових
індичат інактивованою вакциною. У неблагополучних товарних господарствах
рекомендують прищеплювати індиків аерозольно з інтервалом 5 тижнів. протягом усього
виробничого періоду. Перевага гранульованих форм вакцин з шт. У 4 u
Roakin в їх більш високої термостабільності- їх можна транспортувати без
рефрижератора і змішувати з будь-яким звичайним кормом.Актівность
клітинного імунітету у курчат, вакцинованих шт. V4 вірусу НБ, визначали з
допомогою тесту інгібіції міграції лейкоцитів (ІМЛ) .Ісследовалі роль
захисних реакцій слизових оболонок в створенні поствакцинального імунітету.
Курчат вакцинували 2-кратно з 2-тижневим інтервалом интраназально,
ІНТРАОКУЛЯРНОЇ і введенням вакцини в зоб. Кожен курча отримував дозу 7,8 lg
ЕІД50 шт. V4. Через тиждень в сироватці і слізної рідини курчат,
вакцинованих усіма способами, виявляли підвищення рівня AT. оральна
вакцинація inr.V4 індукує у курчат не тільки гуморальні імунні реакції,
але і реакції імунокомпетентних елементів слизових оболонок. показано високу
інтерферуюча активність ПМВ-2, що необхідно враховувати при виготовленні
ембріональної вакцини проти НБ .Одержимо жива
вакцина з мутанта шт. Hitchner В1 шляхом клонування методом бляшок серійними
пасажами при температурі 28-30 ° С. Н.А. Лагуткін і співавт. рекомендують
випускати вакцини з шт. Bl, La Sota і Бор / 74 ВГНКИ з активністю не нижче 9
lg ЕІД50 / мл. і з титром в РДА не нижче 1: 128. Доза при інтраназальному
(Окулярном) введенні має бути 2-4 млн. ЕІД50 / мл, а при пероральному
застосуванні 10-20 млн. ЕІД50 / мл з випаюванням 2 дні поспіль. Е.Ф. Токарик і
співавт. рекомендували свій спосіб профілактики НБ, суть якого полягає в тому,
що курчат в добовому віці імунізують вакциною з шт. La-Sota дозі 20-40
ЕІД5о / на голову. Після вакцинації курчат з кормом вводили пробіотик
Авілакт-1К в добовій дозі 0,5 - 1,5% від маси корму 2-мя циклами по 7-15 днів. з
перервою 15-12 днів. Використання пробіотика Авілакт-lK підвищував антигенность
вірусу La Sota, посилював імунну відповідь
і усуває небажану дію материнських AT при імунізації добових
курчат. Експериментальне обгрунтування ефективної дози вакцини і переклад її
дозування з об`ємних одиниць в кількісні (ЕІД50) проведено у ВНІТІБП. для
курчат 15-20-сут віку ефективна захисна доза (захист 80-100%) при
интраназальной вакцинації становить 103-106 ЕІД50 при титрах анти-ГА
1: 8-1: 512. Для курчат 5-сут. віку, що мали материнські AT, ефективна доза
становить 10б, 3 ЕІД50.В
дослідах з використанням для зараження курчат як 100 ЛД50, так і 2-106 ЛД50 вирулентного
штаму вірусу НБ показано, що застосування вакцини в дозах 1-106-5-106 ЕІД5о
забезпечувало захист як 5, так і 20-сут. курчат. Динаміка накопичення анти-ГА і
стійкості птиці наступна: на 4-й день титр анти-ГА становив 1: 8-1: 16,
ступінь захисту - 70% - на 6-й день - титр - 1:32, захист -90% - на 8-й день титр
- 1: 32-1: 64, захист 100% - на 14-й день титр - 1: 64-1: 512, захист - 100%. максимальне
накопичення анти-ГА спостерігалося через 30 дн., до 120-го дня титр їх знижувався до
1: 8-1: 4. Однак ступінь захисту через 3 міс. становила 92-100%, через 5 міс. -
70-85% .Пассівний
імунітет у курчат має пряме відношення до вірусоносійства і вірусовиделеніе.
Так, при зараженні пасивно імунних курчат патогенним вірусом 68% з них не
проявляли ознак хвороби протягом 80 дн. спостереження, але виділяли вірус протягом
45дн., А вірусоносійство спостерігалося 54 дня. Цей факт має велике
епізоотологічне значення при проведенні заходів по санації господарств від
НБ.Во ВНІІВВіМ
розроблена нова технологія асоційованої вірус-вакцини проти ІЛТ і НБ. вона
дозволяє отримувати вакцини для аерогенним застосування з активністю 7 lg ЕІД50
/ См3 по вірусу ІЛТ і 7,2-7,7 lg ЕІД50 / см3по НБ для інтраназального і орального
застосування - по ІЛТ не нижче 7,0 lgЕІД50 / см3, по НБ не нижче 9,0 lg ЕІД50 / см3.
Після дворазової вакцинації в оптимальних дозах імунітет формується у 85-100%
птахів і зберігається близько 6мес.На основі
мезогенних шт. ГАМІР-61 [А (в) ВН], виділеного з епізоотичного та потім
аттенуированного в культурі клітин нирок теляти і КЕ, розроблена нова
вакцина. Після випробування в лабораторних та камеральних умовах встановлено, що
штам володіє високу імуногенність: забезпечує захист 97-100% птиці,
прищепленої різними способамі- нешкідливий в 10-і 100-кратної дозі для курчат
молодше 60-дн віку, крім того, його можна використовувати в господарствах з гострою
епізоотичною ситуацією Імунітет настає через 72-96ч. висока
ефективність вакцини підтверджена на 8-мільйонному поголів`я птахів в стаціонарно
неблагополучних господарствах Ставропольського і Краснодарського країв. авторами
вивчений механізм формування ранньої несприйнятливості експериментально інфікованих
курчат, щеплених вакциною з шт. ГАМІР-61. Результати дослідів показали, що в
механізмі формування ранньої несприйнятливості до вірусу НБ провідна роль
належить факторам клітинного імунітету. Захисний вплив гуморальних AT
проявляється значно пізніше, і протягом перших 3-5сут. не в повній мірі
відображає істинний імунологічний статус організма.Аерозольная
вакцинація ефективна і безпечна тільки в стадах, благополучних по
респіраторних захворювань вірусної або бактеріальної природи. В протилежному
випадку вона провокує прояв ІЛТ, мікоплазмозу та інших болезнейПрімененіе
інактивованих вакцин. Інактивовані вакцини зазвичай застосовують в поєднанні
з живими. Хороший захисний ефект отримували, якщо одноденних курчат прищеплювали
живою вакциною, а через 3 і 8 тижнів. -інактівірованной.Предложено
одночасне застосування живих і убитих вірусів НБ для вакцинації добових
курчат з низьким рівнем материнських AT. Як живої вакцини використовували
лентогенний шт. La Sota, а в якості інактивованої
- формолвакцину, що містить неіонізовану детергент твін-80 в
вигляді водно-масляної емульсії з низьким вмістом мінерального масла. живу
вакцину вводили в очноямкову-носову область, а інактивовану -подкожно.
Титри специфічних AT у курчат, щеплених живою вакциною повільно зростали в
період з 28-го по 73-й день, в той час як рівень AT у курчат другої групи, щеплених
одночасно живий і інактивованої вакцинами, був постійний. разова
одночасна вакцинація в інкубаційному залі забезпечує стійкий імунітет на
весь період відгодівлі бройлерів і дозволяє виключити ревакцинацію. інактивовані
вакцини готують з вірусу, розмноженого в КЕ. Активність однієї дози вакцини
зазвичай не менше 8 lg ЕІД50 / см3 инактивированного вірусу. концентрація його
істотно впливає на титр сироваткових AT. Як інактівантов
вірусу НБ використовують формальдегід, р-пропіолактон, етиленімін. добрими
ад`ювантна властивостями володів аврідін. Вакцина з аврідіном не викликала
реакцій на місці введення. Крім того, інактивовану емульгованих
вакцину типу "вода в маслі" готували за допомогою р-пропіолактоном і в
як емульгатор використовували арлацел і твін-80. Кур прищеплювали у віці 8
тиж., коли повністю зникали материнські AT. Вакцину вводять 2-3 рази з 4-тижнів.
інтервалом. Підшкірне введення виявилося більш ефективним, ніж
внутрішньом`язове. Максимальні титри сироваткових анти-ГА становили 1: 1280-1: 2560.
AT зберігалися протягом 30 або 35 тижнів. відповідно після 2- і 3-кратною вакцинації.
Напружений імунітет зберігався понад рік. При зберіганні вакцини з ад`ювантом
при 4 ° С більше 18 міс. її ефективність не знижувалася. При одноразової вакцинації
курей у віці 16 тижнів. титр AT починав знижуватися через 12 нед.Вакціна проти
НБ виявилася ефективною проти параміксовірусу птахів типу 3, що викликає
зниження продуктивності у індичок. Хороший імунітет створювала вакцина з гомологичного
вірусу, що вводиться двократно. Вакцина з параміксовірусу-3 захищала птицю від
вірусу НБ, але не навпаки, тобто має місце одностороннє АГ спорідненість.Оцінка поствакцинального імунітету. Ефективність вакцинації залежить від
їм-муногенності вакцинного штаму, наявності пасивного імунітету, віку
курчат, дози і методу введення вакцини, дотримання термінів між щепленнями,
техніки вакцинації, черговості застосування більш-менш аттенуірованних
штамів, фізіологічного стану організму птиці та ін. Тому схеми і
методи вакцинації повинні розроблятися для конкретних господарств виходячи з
епізоотичної ситуації. При проведенні профілактичної вакцинації необхідно
домагатися створення 100% -ного напруженого імунітету у птиці всіх вікових
груп. Цього можна досягти в тому випадку, якщо в господарстві добре
організована система контролю поствакцинального імунітету. ефективність
вакцинації проти НБ можна оцінювати двома способами: біопроб та визначенням
титру анти-ГА. У другому способі досліджують сироватки в РГГА. Для цього через
12-15 дн. після вакцинації беруть кров від 25 курчат з 5-6 точок кожного пташника.
Увага, тільки СЬОГОДНІ!