Ящур

ящур(Food-and-mouth disease, Aphthous fever, Epizootic aphthae (англ.) - Fievre aphthouse (Франц.) - Maul-und Klauenseuche (Нгема.) - Fiebre aphthosa (Ньому.) - це гостро протікає висококонтагіозна хвороба парнокопитних, людей виявляється лихоманкою, везикулярним ураженням слизових оболонок рота, шкіри віночка і вимені- у молодих тварин - поразкою міокарда і скелетних м`язів. Хвороба реєструється в багатьох країнах світу. серотипи А, О, С поширені широко- тип Азія 1 виявлено тільки в азіатських країнах-серотипи SAT I, SAT 2, SAT 3 реєструвалися в країнах Африки, Середнього Сходу та Туреччини.

Відомості про збудника. Вірус откритЛеффлером і ін. В 1898 р

Морфологія іхіміческій склад. Вірус являє собою невелику частку, що складається з одноцепочной лінійної молекули РНК (мол.м. 2,8 * 108), укладену в білкову оболонку, що складається, головним чином, з чотирьох білків VP1, 2, 3 і 4. Віріонна РНК є інфекційною і має ту ж полярність, що і РНК в інфікованій клітині. За аналогією з іншими пікорновірусамі вважається, що з неї транслюється один великий білок. Цей поліпротеїнів потім швидко розщеплюється з утворенням чотирьох поліпептидів-попередників, які є первинними поліпептидами, які виявляються в інфікованих клітинах. Попередники, всвою чергу, розщеплюються з утворенням більш стабільних структурних інеструктурних поліпептидів вірусу. У вірусінфіцірованних клітинах накопичується 6 неструктурних поліпептидів. Тільки для одного з них - VP56a - визначена функція, а саме - він є РНК-завісімойРНК-полімеразою РНК реплицируется за допомогою цієї полімерази, мабуть, спочатку синтезується комплементарна РНК, з якою потім копіюється новаявіріонная РНК. Віріони представляють собою дрібні частинки ікосаедріческой формидіаметром 23-25 нм, мол.м. 7 * 106 Д. Вони складаються з внутрішньої частини, представленої РНК, і білкової оболонки (капсида), яка складається з 32 структурних компонентів (капсомеров), розташованих в кубічної симетрії. Ввіріоне міститься приблизно 31,5% РНК і 68,5% білка. Він обладаетсуммарним негативним зарядом різної величини.

Вірус складається з однонитевой (+1 РНК), укладеної в білковий капсид, який складається з 4-х структурних білків VP1, VP2, VP3 і VP4 Основним антигенними білком є VP1. Оптимізовано условіякрісталлізаціі ВЯ типів А22, О і Азія1. Отримано вчинені монокристали, придатні для встановлення просторової структури вірусу дозволом 3,5А.

Зміна вірулентності штамів різних спалахів добре відомо, але також повідомлялося і про відмінності між ізолятів з однієї і тієї ж спалаху Легкість, з якою вірулентні віруси можуть бути аттенуированного шляхом пасажів на лабораторних тварин (миші, кролики) або в культурі клітин або шляхом обробки in vitroтакже розглядається як відображення мінливості вірусу.

Розрізняють 7 ATтіпов вірусу, які раніше визначали шляхом тесту перехресної захисту, а зараз за допомогою серологічних реакцій АГ мінливість відбувається всередині типів, головним чином, в результаті процесу ступеневої "дрейфу", часто приводить до безперервного спектру без чіткого поділу на окремі підтипи. Спочатку за допомогою КС тесту було ідентифіковано 60 підтипів, але з перевіркою нових штамів проблема диференціації ізолятів стала настільки складною, що від субтіпірованія нових ізолятів фактично відмовилися. Показано, що міотропний №4 і аттенуіровані №645 варіанти ВЯ відрізняються від ісходноговакцінного штаму по первинній структурі капсидних білків. Не виключена можливість того, що зміна біологічних властивостей вірусу пов`язане з цими структурними особливостями.

Віріон поліпептиди (VP1, 2, 3 і 4) змінюються з різною скоростьюVP1 і З змінюються дуже швидко, тоді як VP4 майже не змінюється В відібраних 70 изолятах, які представляють усі 7 серотипів, 69 мали один і той же VP4 Проміжне становище займає і є найбільш удобньм для отримання еволюційних взаємозв`язків - VP2.

Стійкість. В Я стійкий до ефіру, хлороформу, 4-хлористому вуглецю, фреону, ацетону, але швидко інактивується при рН 6 і нижче. Вірус наіболеестабілен при рН 7-7,5. Зрушення його, як в кислу, так і в лужну боку, ведуть до зміни властивостей вірусу. Вапно, хлорне вапно, креолін, крезол, фенол, сулема вбивають вірус лише через кілька годин впливу, розчини лугів (2% -ві) - за 10 хв, формальдегід в концентрації 0,009% інактивує 90% вірусу при 4 ° С за 1 сут. Стійкість вірусу при різних температурахзавісіт від штаму, субстрату, ступеня очищення і інших чинників. Висока температура згубно діє на вірус 90% вірусу втрачають активність при 64 ° Сі рН 7,5 протягом 3 с, при 49 ° С - за 1 год, при 37 ° С - за 21 год. Він порівняно стійкий до впливу факторів зовнішнього середовища . В клаптиках епітеліальних стінок афт зберігає вірулентність 67 та афтозний лімфа, яка містить ВЯ, інактивується при 31 ° С за 24 год. Повну інактивацію вірусу типу О в молоці спостерігали притемпературі від 66 до 78 ° С через 40 с. Деякі штами вірусу болеетерморезістентностни. Так, в Пакистані виділено польовий ізолят, який навіть при прогріванні до 80 ° С протягом 30 хв зберігав інфекційність. ВЯ в певних умовах має стійкість до багаторазового впливу низьких температурУстойчівость звозрастает при внесенні в вірусну суспензію компонентовзащітной середовища.

Низькі температури консервують вірус, при -70 ° С він зберігає свої біологічні властивості протягом декількох років, в гною рідині - 39 дн, в стічних водах - до 103 днів. На поверхні стогів сіна вірус виживає влітку один день, у вересні - 3-6, в жовтні -10 дн. всередині стогів гине через місяць, взимку ж тільки через 7 місяців. Кращими дезінфікуючими засобами є 2% -е або 3% -е гарячі розчини NaOHі 1% -й розчин формальдегіду. У 50% -м розчині гліцерину на фосфатному буфері (рН 7,2) при 4-8 ° С вірус містить матеріал зберігає інфекційність 40 днів. Даний консервант широко використовують при пересиланні матеріалу в лабораторію. Вірус добре зберігається в лиофилизированном вигляді. У непроварених виробах, виготовлених з м`яса свиней, убитих в період генералізації інфекції, вірус руйнувався в окостах протягом 112-119 днів, в лопатковому жирі - 155-169, в кістковому мозку - 169-179, в жирі окосту - 176-183, в беконі - 183-190 днів. Виживання вірусу в різних ковбасах не перевищує 56 днів Вірус зберігався триваліше в жирі, ніж у м`ясі. Деякі штами вірусу чутливі до дії протеаз. Квеществам, інактивує вірус зі збереженням його АГ-властивостей, относятсяформальдегід, етиленімін, гліцілальдегід. Трипсин викликає ізбірательноерасщепленіе структури поліпептиду VP1. Стійкість вірусу залежить від збереження його електріческогозаряда як базового властивості вірусу

Антігеннаяструктура. Капсид побудований з 4 основних поліпептидів (VP1, VP2, VP3 VP4) .В зрілому вирионе міститься близько 60 молекул кожного поліпептиду. Крім 140S (повні віріони), виявлені 75S-капсиди за розміром і формою подібні віріони, але не містять РНК білкові субодиниці 12S-14S і Via-антиген (4S) (Virus infection associoted) - термолабільних КС антиген, що утворюється в тканинах інфікованого організму або культурі клітин, але не є складовою частиною вірусу. Він являє собойРНК-репликазу. Via-антиген придатний для контролю сироваток ВРХ свиней. Онпоявляется в культурі ВНК-21 на 8-й день після зараження. Інфекціонностьюобладают лише повні віріони 140S.

Антігеннаяваріабельность і спорідненість. В даний час відомо 7 AT типів ВЯ: А, О, С, SAT I, SAT 2, SAT 3, і Азія 1. Всередині основних тіповсуществуют варіанти, або підтипи, що відрізняються один від одного. Тип А має 32 варіанта, тип 0-11, тип С - 5, тип SAT 1 - 7, тип SAT2-3. тип SAT 3-4, тип Азія 1 - 2 варіанти. Відомі й інші штами вірусу, що відрізняються отустановленних варіантів. Спочатку за допомогою РСК було ідентифіковано 60 підтипів, але з перевіркою нових штамів проблема диференціації ізолятів стала настільки складною, що від субтіпірованія нових ізолятів фактично відмовилися, хоча і запропонований тест постановки РСК для типування.

Локалізація вірусу. В інкубаційний період від ВРХ вірус можна виділяти з молока 7 днів і зі сперми 4 дня до появи симптомів хвороби. У період, коли хвороба виражена клінічно, епітелій і рідина везикул містять велику кількість вірусу (більше 108 ВД / г тканини або 1 мл афтозної рідини). Аналогічні результати отримані і при дослідженні хворих свиней та овець. У слині в слині можна виявити ще до появи симптомів хвороби в кількості 102-103,7 ЛД50 / мл, а в період прояву їх - 104,5-106 ЛД50 / мл для мишенят-сосунов. Більшість секретів і екскретів інфекційних 4-5 днів, а слина -11 днів. Незалежно від способу експериментального зараження (інтраназально, внутрішньом`язово) овець вірус ящура виявляли в органах дихання і регіональними хлімфоузлах, при цьому у хворих тварин спостерігали виділення вірусу з стравохідно-глоткового і носовим слизом до 10 днів (термін спостереження). Внеблагополучном стаді можуть бути тварини без ознак хвороби, але виделяющіевірус зі слиною.

Особливо небезпечні в цьому відношенні вівці, у яких ящур може протікати без симптомів хвороби. Близько 50% одужав ВРХ виділяють вірус 8 міс., Деякі - до 2 років. Серед клінічно видужали овець 50% тварин можуть бути носіями вірусу протягом 7 місяців. У свиней персистентного носітельствавіруса не встановлено. У стадах буйволів інфекцію протягом багатьох років підтримують вірусоносії і тварини з прихованим перебігом інфекції. Показано, що ВЯ в хронічно інфікованих культурах клітин (ПТ, ПО, СНЕВ) може тривалий час персистувати, не викликаючи ЦПД, причому культивування клітин протягом ряду пасажів в присутність гомологичной ящурного сироватки не звільняє її від персистенції Латентну інфекцію вдавалося загострити за допомогою вірусу герпесу.

Антигенна активність. В організмі природно сприйнятливих тварин вірус індукує утворення типоспецифічних ВНА, КСА і ПА. Поверхневий структурний білок VP1 відповідальний за освіту ВНА, тоді як 3 інших структурних білка (VP2, VP3, VP4) такою активністю не володіють. За допомогою монАТ з різною епітопной спрямованістю в конкурентному ІФА визначається віддаленість епітопів відносно один одного.

У сироватках природно хворих тварин антитіла можна виявити на 8-10-й день після появи клінічних ознак з максимальним підйомом їх титру на 16-21-н день. Потім титр КСА знижується, і до 3 місяців їх присутність не встановлюють, в той час як ВНА зберігаються в крові реконвалесцентів до 24 місяців. Резистентність перехворілих тварин до повторного зараження пов`язана (корелює) з титром ВНА.

Вірус має властивості преципітиногену, тому РДП можна використовувати для визначення його типів і варіантів, вивчення АГ структури Сироватки крові тварин-реконвалесцентів не втрачають свою преципітуючих активність протягом 3 років при 4 ° С.

Експериментальна інфекція. До експериментальному зараженіючувствітельни як природно сприйнятливі, так і лабораторні жівотние`морскіе свинки, мишенята-сосуни, новонароджені кроленята, кошенята і хом`яки до60-дн віку. Адаптаційні властивості епізоотичного ВЯ залежать від особливості штаму і системи культивування Найбільш швидко він адаптується до одношарової культурі клітин нирок телят, організму мишенят і кроленят і більш повільно - до переживає тканини епітелію мови ВРХ Культивування вірусу в країнах, що розвиваються КЕ вдається з великими труднощами і лише відносно деяких штамів і після серії перемежовуються пасажів.

Культивування. Вірус ящура можна підтримувати серійними пасажами на природно-сприйнятливих тварин (ВРХ, свиней, овець, кіз), проте даний метод доріг і пов`язаний з небезпекою виносу вірусу за межі установи. Тому частіше в лабораторних умовах стандартні і польові штами вірусу підтримують на морських свинках, білих мишенят-сосунов, кроленят і культурі ткані.Наіболее чутливі до вірусу культура клітин первинно-трипсінізірована нирки корови, вівці, свині і перещеплюваної лінії ВНК-21 ЦПД проявляється через 6 ч і досягає максимуму до 18-24 год після зараження Зміни клітин супроводжуються порушенням міжклітинних зв`язків, конденсацією субстрату цитоплазми, округленням клітин і розпадом цитоплазми. Вірус розмножується в цітоплазме.В ядрах відбувається укрупнення грудочок хроматину, розташування його вздовж ядерноймембрани, а потім пикноз або рексіс ядра. ЦПД ВЯ розвивається без образованіявключеній і симпластов. ВЯ відноситься до вірусів з коротким циклом репродукції, тому клітинний моношар швидко руйнується і зазвичай через 24 год клітини відриваються від скла.

Тривале пасивування вірусу ящура на лабораторних (природно-сприйнятливих) тварин, а також в культурі тканини веде до аттенуации вірусу (при збереженні вихідної типовий приналежності) і непридатності такого вірусу в якості виробничого штаму при виготовленні інактивованої вакцини. епізоотична характеристика. Джерела і шляхи передачі інфекціі.Основним джерелом інфекції є тварини в гострій стадії хвороби, які виділяють в навколишнє середовище заразне початок зі слиною, лімфою з лопнули афт, молоком, сечею і каловими масами. З моменту зараження і до появи перших симптомів хвороби зазвичай проходить до 7, а іноді і до 14 дн. За цей короткий час хвору тварину встигає контаміновані навколо себе корм, підстилку, годівниці, воду, поїлки, молочний посуд, інвентар (лопати, вила, скребла, мітли), стіни і підлоги приміщення, одяг і взуття обслуговуючого персоналу. Виділяється вірус і з повітрям, що видихається.

Найчастіше зараження відбувається внаслідок безпосереднього контакту хворих тварин зі здоровими в скотарнях, на ринках, пасовищах, трасах перегону худоби на пасовища і т.д. У поширенні ящура серйозну роль грають продукти і сировину тваринного походження молоко, м`ясо, субпродукти, кров, кістки, шкіра, шерсть, копита і роги від убитого худоби. Гній, підстилковий матеріал, сіно, солома, висівки, забруднені виділеннями больногоскота, - джерело ящурного інфекції. При недотриманні правил санітарної та особистої гігієни люди, які доглядають за хворими тваринами, можуть переносити ящур на руках, одязі і взутті, а також на предметах догляду за худобою. Переносниками інфекції можуть бути і несприйнятливі до ящуру тварин, -Собака, кішки, коні, а іноді і кури, качки, гуси, горобці і птиці.

Спектрпатогенності в природних умовах. До ВЯ сприйнятливі ВРХ, свині, вівці, кози, верблюди, буйволи, яки, олені, козулі, джейрани, сайгаки, тури, лосі, кабани, антилопи та інші парнокопитні У природних умовах можуть заражатися і безсимптомно хворіють собаки і кішки. Вірулентність польових штамів варіює, одні з них частіше інфікують свиней, ніж рогата худоба інші- навпаки. Є відомості, що ящуром хворіють слони, ведмеді і зебри. Людина вражається при вживанні не знешкоджених молока від хворих тварин.

Клінічні ознаки. У великої рогатої худоби та свиней в природних умовах болезньпротекает гостро і, як правило (у дорослих тварин), доброякісно. У ВРХ інкубаційний період триває 1-3дня, але може бути до 7-10 днів. Спочатку відзначається погіршення апетиту, млява жуйка, підвищена салівація. Потім підвищується температура тіла (до 40,5-41,5 ° С), настає пригнічення, тварина відмовляється від корму, жуйка припиняється. На 2-3 день на внутреннейповерхності верхньої і нижньої губ, на беззубому краї нижньої щелепи, на мові іслізістой оболонці щік з`являються афти. У деяких тварин афти утворюються в області межкопитной щілини і на вимені. Іноді уражаються всі чотири конечності.Через 12-24 години стінки афт розриваються і утворюються свіжі ерозії. В цей час температура тіла знижується до нормальної, настає рясне слинотеча В результаті чмокаючі рухів в кутах рота з`являється піниста маса. Через 2-3неделі ерозії гояться. При ураженні кінцівок тварини кульгають і частоложатся, а при ураженні вимені відзначається болючість при доїнні, іногдавознікает мастит. На тлі гострих респіраторних інфекцій, властивих багатьом комплексам по дорощують молодняку ВРХ, розвиток ящуру протікає повільно з недостатньо вираженими клінічними ознаками захворювання. Необходімоотметіть, що при масовому Перезараження корів при ручному доїнні у жівотнихнаблюдается поява первинних афт спочатку на сосках вимені, а потім в ротовойполості. При пасовищному утриманні худоби відзначено масове ураження (афти та ерозії) віночка копит, області межкопитной щілини при одиничних випадках ураження ротової порожнини. Мабуть, розвиток клінічного прояву хвороби залежить відворот інфекції спостерігаються у корів аборти, важкі пологи, затримання посліду і різні післяпологові ускладнення є наслідком розмноження вірусу в плаценті.

У телят ящур протікає в безафтозной формі з явищами острогогастроентеріта При злоякісній формі ящур спочатку протікає типово, але встадії одужання, на 7-10-й день, раптово настає різке погіршення стану тварини, почастішання пульсу до 120-140 ударів / хв і 20-25% жівотнихпогібают від паралічу серця.

У свиней хвороба проявляється лихоманкою, пригніченням, ухудшеніемаппетіта. На шкірі кінцівок, в області межкопитной щілини, віночка і мякішейпоявляются червоні хворобливі припухлості, потім афти, які, розриваючись, образуютерозіі. Захворювання кінцівок супроводжується кульгавістю, іноді спаденіемкопитец. Найчастіше афти з`являються на п`ятачку, сосках і рідко - на слизовій ротовойполості. У дорослих свиней ящур триває 8-25 днів. У поросят-сосунов протікає в септичній формі і в перші 2-3 дні хвороби викликає загибель 60-80% тварин.

У овець інкубаційний період триває 2-3 дні. Поражаютсяконечності в області віночка і межкопитной щілини, рідше - слизова оболочкаротовой порожнини. У хворих відзначають лихоманку, відмова від корму, припинення жуйки, кульгавість, пригнічення. Хворі тварини відстають від стада, лягають. Болезньдлітся близько 2 тижнів. У ягнят хвороба частіше проявляється гастроентеритом інередко обумовлює загибель тварин.

У кіз клінічні ознаки хвороби такі ж, як і у овець. Довольночасто у них уражається вим`я. Одужання настає через 10-14 днів.

При розтині виявляють зміни (афти та ерозії) в ротовій порожнині, іноді на слизовій оболонці стравоходу і передшлунків. У телят, ягнят, поросятотмечают геморагічний ентерит і дегенеративні зміни в м`язі серця ( "тигрове серце"). При злоякісному ящура ураження знаходять всердечной м`язі. Вона бліда і в`яла, на розрізі виступаютсеровато-червонуваті плями і казеозно переродження фокуси сіро-білого цветаразлічной величини. Під епікардом і ендокардит крововиливи Подібні ізмененіянаходят також в скелетних м`язах.

патологоанатомічні зміни. Прідоброкачественном перебігу ящуру смертельні випадки серед хворих жівотнихкрайне рідкісні. У ВРХ характерними ознаками є афтозно-ерозіонниепораженія на слизових оболонках ротової порожнини і рубця, безволосих местахкожі носового дзеркальця, губ, сосків вимені, віночка і області межкопитнойщелі Вкрай рідко афти та ерозії утворюються на шкірі навколо ануса. Прізлокачественном перебігу хвороби поряд з афтозно-ерозіонньмі пораженіяміізмененія виявляють у серцевому і скелетних м`язах Поразка міокарда -головна причина смертей. При зовнішньому огляді серця і на розрізі міокарда, особливо шлуночків і міжшлуночкової перегородки, знаходять множественниежелто-сірі вогнища, плями і смужки різної форми і величини. У скелетноймускулатуре спини, передніх і задніх кінцівок (згиначі і разгібателіпальцев, тазобедренная група м`язів), массетерах, м`язах мови, ніжках діафрагмиі міжреберних м`язах виявляють дифузні або вогнищеві дегенеративні поразки м`язових волокон, просочені студневидного желтоватиміінфільтратамі. Для важкого перебігу ящуру характерна наявність геморрагіческогодіатеза у вигляді крововиливів, які локалізуються на слизових оболочкахпіщеварітельного тракту, серозних оболонках, в паренхімі легень, нирок, печінки, головного і спинного мозку. В підшкірній клітковині, особливо в областіподгрудка, міжм`язової сполучної тканини, підслизовому шарі стенкікішечніка, середостінні, виявляються обмежені або дифузні серозниеінфільтрати жовтуватого кольору студневидного характеру.

У інших відовжівотних картина розтину, в основному, та сама, що і у великої рогатої худоби, тільки у неї своїособливості залежно від місця локалізації інфекційного процесу.

гістологічні зміни. Афта наслізістих оболонках є пухирець різної форми і велічіниГістогенез її починається з дегенеративних ураження клітин шиловидного слояКлеткі набухають, округлюються, а ядра пікнотізіруются. У сосочковом слоеподлежащей сполучної тканини у відповідь на дистрофію клітин проісходітрасшіреніе капілярів, набряк і клітинна інфільтрація. Проникнення в толщупораженних клітин і виникнення дрібних внугріепітеліальних бульбашок. Помере продовження репродукції вірусу в клітинах шиловидного шару і накопленіясерозного ексудату відзначають більш великі руйнування клітин і іхдіскомплексацію, злиття дрібних бульбашок в один великий і формування афти. У зв`язку з наростаючими запальними явищами в сосочковом шарі афта.заполняется нейтрофільними лейкоцитами Ексудат стає серозно-гнійним, Азат гнійним. Через механічних причин і запальних процесів стенкіафти надриваються і виявляється ерозія. Очищення дефекту епітелію отпродуктов некротичного розпаду відбувається на 5-7-е добу, а ерозіоннаяповерхность повністю покривається епітелієм на 12-ту добу. При осложненііпроліфератівних процесів в місцях ерозії вторинної мікрофлорою развіваетсягнойное запалення підлеглих тканин з утворенням виразкових ураженні. Онізажівают за допомогою натягу з формуванням сполучнотканинного рубця.

Афтозно-ерозійні ураження на шкірі протікають за тим же типом, що ина слизових оболонках Через більш частих ускладнень вторинної мікрофлорою Наконечний в області межкопитной щілини нерідко розвивається пододерматит зподальшим відпадінням рогового башмака, а в молочній залозі -серозно-катаральний або гнійний мастит.

При злоякісному перебігу поряд з афтозно-ерозіонньмі пораженіяміобнаружівают важкі дегенеративні зміни в серцевому і скелетноймускулатуре. Вони розвиваються одночасно з появою афтозно-ерозіоннихпораженій на слизових оболонках. В уражених ділянках міокардагістологіческі відзначають дістоофіческо-некротичні процеси в мишечнихволокнах (білкова дистрофія, воскоподібний некроз, лізис, зернисто-глибчатийраспад), клітинно-проліферативну реакцію з боку інтер-сгщіальной тканини іявленія розлади кровообігу. Часто спостерігають відкладення солей вапна впораженних м`язових волокнах. На початку розвитку запального процесу вміокарде більш виражений альтернативний, а в подальшому - проліферативний компонент.Очагі некрозу м`язових волокон поєднуються з ділянками часткового або полногозамещенія уражених волокон клітинним інфільтратом і грануляційною тканиною.

У скелетних м`язах зустрічаються дистрофічні і некротіческіеізмененія м`язових волокон з реактивно-клітинними процесами в інтерстіціі.Пораженія носять зазвичай вогнищевий характер. 

Діагноз. Діагностика заснована на епізоотологічних даних, клінічних ознак, патологоанатомічних змін і лабораторних дослідженнях. Підозри викликають тварини зі схожими клінічними ознаками. Епізоотологічний діагноз - висока контагіозність, вибіркове ураження толькопарнокопитних. Методи лабораторної діагностики ящуру варіюють в залежності від того, чи потрібні раннє виявлення і типова (варіантна) ідентіфікаціявіруса (рання діагностика) або виявлення та ідентифікація спеціфіческіхпротівоящурних AT у тварин-реконвалесцентів (ретроспективна діагностика).

Виділення вірусу. Ефективність виділення вірусу з патологіческогоматеріала підвищується при використанні методів очищення і концентрірованіявіруссодержащіх суспензій Завдяки зручності виконання, економічності, а головне, можливості швидкого отримання результатів, що дозволяють одновременноопределіть типову і вариантную приналежність епізоотичного вірусу, чащевсего застосовують РСК або РДСК. Однак, коли доставлене кількість вірусногоматеріала недостатньо для дослідження або РСК дає негативний результат неспецифічну затримку гемолізу, то ставлять биопробу на ВРХ (не менше 2голов) у віці 18 міс, вводячи 0,1 мл суспензії отриманого матеріалу внесколько точок слизової оболонки мови і мякишей конечностей- загальний об`еміспитуемого матеріалу 2-3 мл. Поява афт на місці введення матеріалу з последующімподтвержденіем в РСК свідчить про наявність ВЯ. Однак метод доріг і связанс небезпекою виносу вірусу за межі установи. Тому в діагностіческойпрактіке він застосовується дуже рідко. Найчастіше для біопроби іспользуютмишат-шмаркачів 4-6-дн віку, морських свинок масою не менше 500 г і первинну культуруклеток нирок телят, поросят, ягнят, щитовидної залози великої рогатої худоби та перещеплюваних клітини ВНК-21, IB-RS-2. Біопроба на мишахудобна і економічна. ІД5о випробуваного штаму на мишенята-сосунов і крупномрогатом худобі однакові. Мишенята-сосуни більш чутливі до вірусу ящуру, чемморскіе свинки. Однак необхідно мати на увазі, що оцінка результатовтітрованія на мишенята-сосунки нерідко скрутна.

Морські свинки легко заражаються при інтрадермальном введеніівіруссодержащего матеріалу в плантарную поверхню задніх лапок методомтунелірованія в дозі 0,2-0,5 мл. Заражають не менше 5 голів. Первинні пораженіяобично з`являються через 2-5 днів. (У міру дозрівання). Вторинні ураження -везікули в ротовій порожнині - зазвичай розвиваються при зараженні штамами, адаптованими до морським свинкам.

Індикація та ідентифікація вірусу. Вкачестве експрес-методу в даний час широко застосовується ПЛР. Це бистрийі чутливий метод виявлення ВЯ в тканинах шляхом ензіматіческойампліфікаціі РНК гена полімерази.

РСК по 100% -ному гемолизу. Застосовується для визначення типів іподтіпов (варіантів) ВЯ, що викликали захворювання тварин, а також для проверкіпроізводственних штамів ВЯ при виготовленні вакцин і лабораторних штамів в наукових-дослідній роботі (див. "Методи лабораторної діагностіківірусних хвороб тварин" (М. Атропроміздат, 1986 .250-258 ).

Антигенну спорідненість (R) більше 70% свідчить про те, що штами за антигенними властивостями ідентічнидруг одного і відносяться до одного і того ж варіанту, від 10 до 70% - до разлічнимваріантам (підтипів) і менше 10% - до різних типів.

РСК по 50% -ному гемолизу. Успішно застосовують в работенаучно-дослідних лабораторій та установ біологічної промишленності.Разработан спосіб вивчення імунного статусу вакцинованих проти ящуражівотних в РСК. Він дозволяє фахівцям на рівні обласних ветлабораторійпроводіть моніторинг за імунним станом стад в простий і достовернойреакціі.

РНГА. Це простий, прискорений, чутливий метод ідентифікації ВЯ.По чутливості реакція перевершує загальноприйнятий метод типування ВЯ ВРСК в 8-16 разів. Суть її полягає в тому, що навантажені AT еритроцити агглютініруютсяпрі контакті з ящурного АГ гомологичного типу.

Типування вірусаящура. Визначення типу ВЯ методом перехресного імунітету. Іспитаніеперекрестного імунітету на ВРХ з метою визначення типової прінадлежностіполевого штаму ВЯ проводиться лише в тому випадку, якщо по лабораторним тестамобнаружівается новий тип ВЯ, раніше не зустрічався в країні Визначення тіпаВЯ методом перехресного імунітету можливо і на морських свинках.

Штами счітаютідентічнимі, якщо вакцина захищає тварин від розвитку генералізованногопроцесса при зараженні використовуваними штамами. У разі іммунологіческогоотлічія штамів вакциновані тварини, інфіковані гетерологічнимштаммом, хворіють генералізованої формою ящура.Прі визначенні в культурелеток типу ВЯ його відносять до того типу, сироватка проти якого предотвращаетЦПД. Розроблено варіант універсальний ерітроіммуноадсорбціі (УЕІА), позволяющійопределять АГ ВЯ в більш високих титрах, ніж в РСК і РПГА.

ІФА. Високоефективний для виявлення як 146S-, так і 12Б-компонентів ВЯ. Цей методв 500 разів чутливіші РСК при дослідженні проб афтозного епітелію. Установленависокая ступінь специфічності і чутливості ELISA для ідентифікації та тапіроврнія ВЯвсех 7 серотипів в епітеліальних тканинах. Встановлено високу чувствітельностьсендвіч-варіанту ІФА (на основі лужноїфосфатази), який по еффектівностіпревосходіт в 207-219 разів, а з хромогенного субстратами - в 4-64 рази. ІФАможет бути придатною в системі лабораторної діагностики ящуру при ісследованіідіагностіческіх штамів. Для виявлення AT до ВЯ в ІФА можна використовувати проби крові, висушеної нафільтровальной папері Початковий обсяг гепаринизированной крові дорівнює 7,65мкл.

Ретроспективна діагностика з метою визначення типу і варіанта ВЯ, що викликав в минулому захворювання тварин, заснована на ідентифікації AT в РПСК, РДП і РРІД, НРІФ, реакції серозащіти на мишенята і РН в культурі клітин.

Для достовірного виявлення AT і визначення їх типовий специфічності проби сироватки кровідолжни бути взяті не раніше 7 дн з моменту появи у тварин прізнаковвезікулярного захворювання або проведення вакцинації. На дослідження следуетнаправлять 5-10 проб сироватки від кожної вікової групи на партію пробсивороткі, на правляться для дослідження, оформляють супровідний документ.

Виявлення, ідентифікація типової специфічності і колічественноеопределеніе AT ВЯ вРРІД, РПСК, РНСК і Ніф можуть проводитися в умовах звичайних ветерінарнихдіагностіческіх лабораторій і не вимагає створення більш суворого санітарногорежіма, оскільки проводяться з неінфекціонньмі матеріалами.

Для виявлення інгібіторних (неповних) AT застосовують РНСК (або РПСК). Ці АТотлічаются високою авідності. Вони формують комплекс АГ-АТ, які не адсорбірующійкомплемент. Зв`язуючись з АГ швидше повних AT, вони блокують його, але не пов`язаний при цьому комплемент у присутності гемолітичної сироватки викликає лізис еритроцитів. Інгібіторні AT виявлені зараз прімногіх інфекціях, в тому числі при ящуре. Дана реакція застосовується дляопределения типів збудника посивороткам перехворілих тварин, а також для виявлення постінфекційних іпоствакцінальних AT.

Типування ВЯ по сироватка перехворілих тварин в РДП. У реакціііспользуют АГ з очищеного і концентрованого лапінізірованного вірусу типів, А, С та ін., Сироватки від перехворілих на ящур тварин (не придатні дляісследованія в РДГ сироватки крові тварин, двічі перехворіли ВЯ разлічнихтіпов), типоспецифічні сироватки, агарового середовища

Постановка реакції в центральні лунки 7-ми 6-вугільних систем наагарових пластинках поміщають відповідні АГ типів О, А, С та ін. Вперіферіческіе лунки поміщають проби випробовуваних і контрольних сироваток. Затемпластінкі витримують у вологій камері при 37 ° С. Реакцію враховують через 16,24, 48 і 72 годин після постановки. Позитивна реакція характерізуетсяобразованіем однієї або двох чітких ліній преципітації між лункою з АГ ісивороткой. ВЯ відносять до того типу, з АГ якого випробувана сироватка даетположітельную реакцію В разі виявлення в сироватках преципитирующих AT до 2 і більше типів вірусотносят до того типу, з АГ якого досліджувані сироватки дають найбільший процентположітельних реакцій.

РІД. Суть її полягає в формуванні зони спеціфіческойпреціпітаціі вірусних антигенів антитілами, включеними до складу агаровогогеля. Реакція є тіпоспеціфічной, дозволяє провести дослідження потіпірованію і колічественном- визначенням постінфекційних і поствакцинальних AT

Зустрічний ІЕФ. Може бути з успіхом використаний для серотипування вірусаящура. Чутливість його така ж, як і РДП, але облік результатовпроізводітся через 1,5 год, тоді як реакція імунодифузії вимагає не менше 24 годин.

Ніф. При ящуре дозволяє проводити диференціацію AT перехворілих тварин отвакцінірованних. Виявлення в Ніф специфічного світіння свідчить оналічіі в випробуваної сироватці постінфекційних антитіл, тобто про переболеванііжівотного ящуром. За допомогою РНГА визначають напруженість поствакцінальногоіммунітета у ВРХ. Встановлено кореляцію результатів, отриманих при РПГА і РН.С допомогою монАТ в РН або ELISAопределяют НЕ нейтралізуемой варіанти ВЯ. Залежно від чутливості кмонАТ всі варіанти ВЯ розділені на 3 групи Варіанти 1-ї групи мали мутацііпреімущественно в області 140-160 VP1, варіанти 2-й і 3-ї груп мутують в області 204 VP1 і 70, 139, 195 VP3 соответственно.Определени дві великі АГ зони вірусу: чутлива і нечутлива ктріпсіну (VP1 140-160 і VP3 відповідно).

Реакція серозащіти на мишенята-сосунов. Використовується для определеніетіпа вірусу по сироватка тварин-реконвалесцентів Для постановки реакціііспользуют еталонні (адаптовані до організму 4-7-денних мишенят-сосунов) штами вірусу різних типів. Штами повинні бути типоспецифічними і іметьтітр на мишенята-сосунов не нижче 7 lg в 1 г.ВЯ, що викликав захворювання тварин, відносять до того типу, при зараженні которимпрівітие сироваткою мишенята залишилися живі. Необхідною умовою достовернойоценкі реакції серозащіти є обов`язкова загибель контрольних мишенят, яким введено вірус, в той час як контрольні мишенята, яким вводили толькоіспитуемую сироватку, повинні вижити.

РН в культурі клітин. Для постановки РН необхідно мати 24 пробіркікультур клітин Відсутність ЦПД в пробірках, в які внесено суміш вірусу ссивороткой, при чітко вираженому ЦПД в контрольних пробірках, вказує наналічіе в досліджуваній сироватці ATпротів даного типу вірусу. Специфічність ЦПД можна встановити шляхом ісследованіяв РСК культуральної рідини, отриманої з пробірок з вираженим ЦПД.

Диференціальна діагностика. При диференціальної діагностики ящуранеобходімо виключити ВС, ВЕС, ВЕС, катаральну лихоманку овець. Длядіфференціальной діагностики в лабораторіях використовують діагностичні набори, що випускаються біологічної промисловістю, для ящуру і ВБС.

Іноді вматеріале від людей, підозрюваних в захворюванні ящуром, виділяли возбудітеляентеровірусной інфекції людини - вірус Коксакі серотипу В. Вірус викликав відімоеЦПД в перещеплюваних культурах клітин протягом 24 год, маючи ікосаедрічеськая форму, розміром 20-30 нм і викликав загибель мишенят при інтрацеребральному зараженні.

Імунітет. Тривалість іммунітетау тварин, які перехворіли на ящур, становить 8-12 місяців, у свиней - 10-12, у овець-близько 18 місяців. Окремі тварини-реконвалесценти набувають некоторуюустойчівость проти гетерологічних типів вірусу. При ящуре вознікаеттканевий і гуморальний імунітет. Місцевий імунітет формується раніше, чемгуморальний, але він коротший. Тому при реінфекції через 4-7 місяців. на местевведенія вірусу утворюються афти, але генералізації процесу не проісходіт.Установлено, що при ящуре комплекс захисних реакцій організму начінаетдействовать з моменту контакту збудника зі слизовими оболонками, обумовлюючи певну закономірність у розвитку специфічного местногоіммунітета. На білих мишах BALB / c і морських свинках, іммунізірованниходінаковимі дозами антигену ВЯ кількох штамів типу SAT-1, продемонстрована связьпоказателей тестів бласттрансформації, ІФА і сероредукціі, котораяопределялась статистично значущими коефіцієнтами кореляції. Еффектівностьпервічной імунної реакції організму на клітинному рівні може колічественнодетермініровать розвиток гуморального фактора імунітету. При парентеральнойвакцінаціі ВРХ протівоящурной вакциною рівень місцевого імунітету в большейстепені, ніж гуморального, залежить від концентрації імунізують антігенавіруса і кількості ад`юванта в прівівной дозі. Ревакцинація тварин дажеменьшім, ніж прищеплювати доза, об`ємом вакцини сприяє посиленню местногоіммунітета, в той час як рівень ВНА залишається незмінним. Це, мабуть, вказує на відносну автономність місцевого імунітету у ВРХ пріпрофілактіческой вакцинації. До кінця 1-го тижня. виробляються ВНА, а через ещенесколько днів - КСА і потім ПА ВНА зберігаються протягом декількох місяців, Аксай і ПА - 2-3 міс.

У тварин-реконвалесцентів на відміну від щеплених інактівірованнойвакціной відсутні ATк вірусіндуцірованная полімеразі.

Імунітет зазвичай триває близько року і навіть довше Він ще сохраняетсяпосле зникнення ВНА і залежить від властивостей инфицирующего штаму вірусу, атакож від реактивності тваринного і завжди спрямований проти гомологичного тіпавіруса.

Доведено можливість пасивної передачі поствакцинального клеточногоіммунітета Показано участь цитотоксичних лімфоцитів в ранні срокіформірованія протівоящурного імунітету. Клітинний імунітет пов`язаний сфункціонірованіем лімфоцитів, рецепторного апарату і з`єднання їх сантігеном. За клітинний імунітет відповідають Т-клітини.

У РФ для пріменяютгідроокісьалюмініевую вакцину, яку готують з інактивованого вірусу, що культивується в переживає тканини слизової оболонки мови неімунного кящуру ВРХ (метод Френкеля), а також з вірусу, отриманого в суспензіоннойкультуре клітин ВНК-21/13. Вакцини містять інактивований формаліном, вірус повідомляють імунітет дорослим тваринам до 4 міс. Вірус в проізводственнихусловіях концентрують ультрафильтрацией, поліетиленгліколем іліполіетіленоксідом, що дає можливість підвищити концентрацію антигену вдесяткі і сотні разів. Перша інактивована вакцина була запропонована Вальдманомі Кобе в 1938 р.У надалі ця вакцина була модифікована в різних варіантах. У настоящеевремя для великої та дрібної рогатої худоби, як правило, пріменяютсорбірованние, а для свиней - емульговані вакцини ТрехвалентнаяГОА-формолвакцина з вірусу ящура типу А №550, Про №1618 і С №564 авірулентние, нешкідлива, стерильна і відрізняється вираженою иммуногенной активністю. Імунітет у щеплених тварин настає на10-14-й день і досягає максимуму через 3-4 тижні. Імунітет у взрослихжівотних триває 6-12 місяців, ВРХ обичноревакцініруют 1 раз, свиней - 2 рази в рік ВНА в сироватці крові з`являються ужек кінця 1-го тижня, досягають максимального титру в 3-5 тижнів, потім іхконцентрація поступово знижується. При систематичної імунізації взрослихжівотних проти ящуру інактивованими моновакцинами у них поддержіваетсястабільний рівень ATне нижче 4,5 log- протязі 6 міс. Протягом наступних 3 місяців йде повільне сніженіетітров AT до 3,5-3,7 log- до кінця 6-го мес.Колостральний імунітет добре виражений, однак телята, які не отримували молозиво, не мають сироваткових AT, незважаючи на те, що корови були імунізовані. Після прийому молозива титр AT в сироватці телят більше, ніж в сироватці матерів. ATу телят зберігаються протягом 5 месяцнев, хоча пасивний захист триває до3-х місяців. Тривалість колострального імунітету також залежить від тіпавіруса. Материнські ATмогут заважати утворенню імунітету у потомства.

Механізмпротектівного імунітету до ВЯ in vivoотлічается від механізму нейтралізації вірусу in vitro. Освіта ВНА у тварин-реконвалесцентів викликають тільки повні віріони, (140S-частинки). На цьому основанііоб імуногенності інактивованих вакцин можна судити по концентрації 140S антигену.

Для свінейпріменяют інактивовані вакцини. Природний імунодефіцит у свиней удалосьпреодолеть завдяки застосуванню масляних ад`ювантів. Напружений ітривалість імунітет у свиней наступав після 2-кратної вакцинації. Свінейпрівівают починаючи з 2-місячного віку і ревакцинируют через 4 месяца.Колостральние AT подавляютвакцінальний імунітет, особливо якщо поросят прищеплюють в перші 30 днів жізні.Вакціни з масляним ад`ювантом створювали і у телят більш виражений і продолжітельнийіммунітет, ніж ГОА-вакцина. Виявилася можливою одночасна вакцинація КРСпротів ящура і чуми. Якщо інактивовану поливалентную ГОА-вакцину протівящура і живу - проти чуми вводити одночасно підшкірно в область шиї з разнихсторон, то утворюється такий же імунітет, як і при роздільній вакцінацііпротів кожного захворювання. Живі вакцини проти ящуру НЕ разработани.Многочісленние спроби в цій області не дали позитивних результатов.Аттенуірованние штами, виявлялися слабоіммуногеннимі або ж реверсібельнимі.

Розроблено методоценкі активності протівоящурной вакцини за рівнем ВНА. Установленазавісімость від активності вакцини рівня ВНА яка виражена графічно. Напідставі цієї залежності складені допоміжні таблиці, що дозволяють поустановленному рівнем ВНА визначити імуногенну активність вакцини.

Оцінка поствакцінальногоіммунітета. Максимальні титри (в РН) поствакцинальних AT зазвичай відзначаються на 28-й день послевакцінаціі- їх рівень не залежить від розведення вакцини (в діапазоні 1: 1-1: 16) і прямо корелює зі специфічним протективного імунітетом.

На морських свинках показано, що імуногенність протівоящурной вакціниможет бути оцінена в реакції сероредукціі бляшок без контрольного зараженіяжівотних. Ця оцінка дозволяє визначити необхідну дозу випробуваної вакцінидля забезпечення гарантованого імунітету. Показана коррелятивная связьмежду первинним імунною відповіддю на клітинному рівні (тест бласттрансформації) і ступенем розвитку гуморальної імунної реакції (тести іммуноферментнойсероредукціі). Реакція гіперчутливості сповільненого типу позволяетізучіть in vivoразвітіе протівоящурного імунітету в ранній період після вакцинації. Показано, що у дорослого ВРХ в зоні високого радіоактивного зараження після іммунізацііконцентрірованной протівоящурной вакциною утворюються специфічні AT, проте імунітет при етомменее напружений і більш короткий у порівнянні з неопроміненими тваринами.

Ветеринарно санітарна експертиза. Туші іпродукти забою від хворих і підозрілих на захворювання випускати в сирому відезапрещается. При наявність дегенеративних або інших патологічних змін вмускулатуре тушу з внутрішніми органами направляють на утилізацію. При відсутності патологістологіческіх змін дозволяється переробляти на варені, варено -копчёние ковбаси, консерви або проварку.





Увага, тільки СЬОГОДНІ!