Класична чума свиней

Відео: vaccination of pigs. вакцинація свиней проти класичної чуми

чума свиней(Класична чума свиней, КЧС, Hog Holera, Classikal swine Fever, Svine Fiver (англ.) - Schweinepest (нім.) - Pestes Porcine (франц.) - Peste Porcina (ісп.) - це висококонтагіозна інфекційна хвороба, що характеризується лихоманкою, ураженням кровоносної і кровотворної систем, крупозним запаленням легенів і крупозно-діфтеріческім запаленням товстого кишечника. 

Перші описи КЧС, згідно Hanson, відносяться до 1810 г.в штаті Теннесі (США). Пізніше в 1830 р спалах зареєстрована в штаті Охіо. У Франції подібне захворювання відзначалося в 1822 р, в Німеччині - в 1833 р, але інші повідомлення підтверджують, що ця хвороба вперше була відкрита в Англії в 1862 р і, відповідно, поширилася на Європейський континент. У Південній Америці і Південній Африці Захворювання з`явилося в 1899 і 1890 рр. відповідно. В даний час зустрічається повсюдно, за винятком США, Канади, Австралії, Ісландії, Ірландії, Новій Зеландії, Норвегії, Швеції. В результаті планових протиепізоотичних заходів і, зокрема, широкого застосування живої вакцини, масштаби її поширення різко скоротилися. Спостерігаються обмежені Ензоотичні спалаху, що завдають, однак, значних економічних збитків.

Відомості про збудника.Вірусну природу КЧС встановили в 1908 р Швейнітц і Дорсі.

Морфологія і хімічний склад. Віріони - оболонкові частинки діаметром 40-60 нм з нуклеокапсидом діаметром близько 29 нм. У структурі ВКЧС виявлено 3 глікопротеїну з мол.м 44, 33 і 55 кД. Геном вірусу -Г-Стек гілок РНК позитивної полярності з розміром в 12284 тис. Нуклеотідов.Едінственная рамка зчитування, ймовірно, відповідає поліпротеїнів з довжиною 3898 амінокислотних залишків (12 kb), 4 структурних білків (3 гликопротеида-VPI, VP2, VP3 і 1 капсидний білок -ср) і 3-7 неструктурних білків (р125, Р80, gp62, gp53, gp48, gp25 і gp20). Вважають, що VPI і VP2 є оболонкові білки. Плавуча щільність, в залежності від градієнта матеріалу і клітин, що забезпечують розмноження вірусу, складає 1,12-1,17 г / см 3.Коеффіціент седиментации становить 140-180S .. Геномна РНК вірусу може бути використана в якості вихідного матеріалу для отримання до ДНК і її клонування.

Стійкість. ВКЧС вважається порівняно малостійким до високих температур. Сироватка крові хворих КЧС при 37 ° С містить активний вірус протягом 11 дн. Повна його інактивація при такій температурі настає через 18-20 діб. При 56 ° С вірус інактивується через 60 хв, при кип`ятінні -моментально. У свинарниках (підлоги, стіни) не втрачає вірулентності протягом року-низькі температури його консервують. Вірус, що міститься в сироватці крові хворих свиней, що зберігалася при температурі 2-4 ° С, не втрачає активності 4-6 міс .. У свинячих тушах залишається вірулентним після 2-б-міс. зберігання в холодильнику при температурі -20-25 ° С. Добре зберігається в лиофилизированном стані при рН між 5 і 10. Швидко інактивується під дією ефіру, хлороформу і дезоксихолат, чутливий до трипсину і ліпази, MgCl2 не робить на нього стабілізуючого дії. Кращими дезінфікуючими засобами є 2% -ний розчин NaOH, хлорне вапно 1:20 і 3-6% -ве крезолового масло. ВКЧС зберігає вірулентність і АГ-властивості в нативної і ліофілізованої крові при зберіганні в замороженому стані тривалий час - 2456 дн (термін спостереження). Інактивація вірусу фізичними засобами залежить від середовища, що містить вірус. У культуральної рідини інфекційність втрачається через 10 хв при 60 ° С, тоді як в дефібринованої крові вірус не інактивується протягом 30 хв при б8 ° С. Вірус стабільний при рН 5-10, але при значеннях вище і нижче вказаних втрачає інфекційність.

Антигенна структура, варіабельність і спорідненість. За вірулентності розрізняють А-, В- і С-варіанти вірусу. До групи А входять вірулентні епізоотичних штами, що викликають у свиней різного віку гостро протікає хвороба, а також лапінізірованние і "холодні" варіанти культурального вірусу. Віруси підгрупи В вірулентніші тільки для поросят і при циркуляції в стаді викликають т.зв. атипову або хронічну чуму. До підгрупи Відноситься американський слабовірулентнимі шт. 331. Достовірних даних в відношення АГ-варіабельності вірусу немає. аріабельность вірусу проявляється не тільки різної вірулентністю для свиней, але і різними АГ взаємовідносинами з вірусом діареї ВРХ. Встановлено одностороннє спорідненість між ВКЧС і вірусом діареї ВРХ: AT до вірусу діареї ВРХ нейтралізують ВКЧС, але AT до ВКЧС НЕ нейтралізують вірусу діареї.

Локалізація вірусу. Вірус пантропен, накопичується у всіх органах і тканинах, але переважно в лімфовузлах, кістковому мозку, слизовій оболонці кишечника і ендотелії кровоносних судин. Він проникає в організм через кишковий і дихальний тракти. У тонзіллярних лімфовузлах відзначається найбільша його концентрація. Збудник розмножується в лейкоцитах периферичної крові. Через 6-10 год після потрапляння в організм його можна виявити в крові. На 3-й день після підйому температури тіла накопичується там в максимальній концентрації. У поросят, заражених експериментально per os, через 7 год вірус виділяли з мигдалин, а через 16 год - з крові. З 3-го по 7-й день титр вірусу, що виділяється з мигдалин, крові і селезінки, був найвищим і становив 105 БОЮ / мл. У привушної і підшлунковій залозах, підщелепних, заглотковий, мезентеріальних та інших лімфовузлах, респіраторних шляхах і кишковому тракті вірус виявляли на 3-й день в ЦНС, серце, кістковому мозку, яєчниках, матці - на 4-й день після зараження в титрах 103 , 2-105 БОЮ / мл. Він виявлений також в епітелії мигдалин, в слизовій оболонці глотки, нирок, сечового і жовчного міхура, в підшлунковій залозі, слинних залозах, надниркових залозах, щитовидній залозі. У легких вірус локалізувався в ендотелії кровоносних судин і адвентиции, а також в альвеолярних макрофагах. На 6-й день після зараженіявірус з організму хворих свиней виділяється з сечею, фекаліями, виділеннями зносу і очей. Вірусовиделеніе починається в інкубаційному періоді і посилюється в міру розвитку ознак хвороби. Виділення вірусу припиняється вже через 3дн після зникнення лихоманки, однак є дані про те, що у хронічно хворих тварин вірусоносійство виявляють до 95-го дн після зараження.

Доведено трансплацентарний передача ВКЧС в різні періоди поросності. Поросята після народження тривалий час залишаються прихованими вірусоносіями і служать джерелом зараження. Свиноматки-носії вірусу народжують клінічно здорових, але інфікованих і іммунотолерантних поросят, які виділяють вірус у великих кількостях протягом 4-6 місяців. Цей феномен хронічної інфекції є факторами персистенції вірусу серед популяції свиней. Трансплацентарний передача вірусу супроводжується тератогенну дію і високою перинатальною смертністю. Рівень летальності серед новонароджених поросят знаходиться в прямій залежності від інфікованості плодів. Всі поросята з віремією гинуть.

Антигенна активність. У сироватці кровісвіней-реконвалесцентів не виявляється ВНА, ПА і КСА. Отримано монАТ, специфічні до 3-м структурним вірусним протеїнів: Рт2, Р150 і Р12. ATреагіровалі тільки з високо очищеним вірусом. Виражений імунітет розвивається у свиней, починаючи з 6-8-тижнів віку, ВНА з`являються на 7-10-й день після інфікування або імунізації, досягають максимуму через 3-4 тижні і зберігаються понад рік. Пасивні AT у поросят можуть зберігатися 2-3 міс .. AT молозива до ВКЧС, продуковані свинями, вакцинованими за 55 дн до опоросу, характеризувалися високою активністю і коротким періодом напіврозпаду, але придушували первинну імунну реакцію потомства на подальшу вакцинацію. У свиноматок, вакцинованих не раніше, ніж за 86 днів до опоросу, вони володіли значною авідності.

Експериментальна інфекція. Легко відтворюється на НЕ імунної підсвинків масою 40-50 кг при підшкірному зараженні.

Культивування. Культивування вірусу в лабораторних умовах на НЕ імунної свинях можна проводити практично нескінченно Цей метод доріг і небезпечний Вірус вдається репродукувати також в первинній культурі клітин легенів, селезінки, нирки і лейкоцитів без вираженого ЦПД. Оптимальний вік культури свинячих лейкоцитів коливається від 1 до 5 діб. Максимального рівня титр вірусу досягає через 4-8 дн. після зараження. Рівень репродукції різних штамів вірусу в культурах макрофагів інтактних ііммунізірованних поросят однаковий Він так само розмножується в культурі клітин тестикул поросят, викликаючи ЦПД при використанні аргінін буферної середовища, і в перещеплюваної лінії клітин нирки поросяти (РК-15).

Точно визначити інфекційну активність вірусу можна методом флуоресцентних бляшок, оскільки інфекційні титри відтворювані і можуть бути визначені вже через 24 години після інфікування культури Розроблено метод титрування вірусу шляхом обліку негативних колоній під агаровим покриттям. Підібрано 3 лінії клітин, що формують негативні колонії при культивуванні в монослое РК15, КРД 10 і RPTY. Запропоновано також метод титрування ВКЧС в культурі клітин за допомогою феномена екзальтації. На початку культуру інфікують ВКЧС, а потім (через певний час) - вірусом НБ (шт. Міадера). Клітини, в яких розмножився ВКЧС, під впливом вірусу НБ руйнуються (ЦПД), тоді як клітини, заражені одним ВКЧС, не змінюються. Замість вірусу НБ можна використовувати вірус хвороби Тешена Крім того, запропонований тест екзальтації гемаглютинації і інгібіції ЦПЕ з використанням клітин нирки свиней і вірусу НБ (шт. Саго) Тут Цитопатогенні вірус відзначено зниження в результаті попередньої інокуляції ВКЧС, ця ингибиция супроводжується значним збільшенням освіти ГА вірусу НБВ місце останнього успішно застосовували один зі штамів вірусу грипу.

ГА-і гемадсорбірующіе властивості ВКЧС - не встановлені.

Тератогенні властивості. ВКЧС має тератогенних та іншими патогенними властивостями в залежності від стадії вагітності, коли відбувається зустріч матері і плоду з вірусом. При інфікуванні супоросних маток на 65-й день відбувалася загибель плодів більш ніж в 30% випадків. У що залишилися в живих гістеректомірованних плодів виявлялася виремия і були відсутні ВНА. При зараженні свиноматок між 94 і 101 днів. поросності загибелі плодів не спостерігалося. Очевидно 65-й день вагітності є останнім терміном для встановлення персистентной виремии у плода.

Епізоотологічне Характеристика. Джерела і шляхи передачі інфекції. Джерело інфекції -хворі тварини, які виділяють вірус у зовнішнє середовище з сечею, фекаліями і секретами слизових оболонок очей і носа, а також реконвалесценти. Здорові Свині, перебуваючи в контакті з хворими і користуючись загальним годуванням і водопоєм, легко і швидко заражаються. Зараження відбувається, головним чином, через травний тракт з інфікованими кормами і водою, а також через дихальні шляхи і пошкоджену шкіру. Один з основних шляхів поширення інфекції - завезення продуктів забою хворих на чуму свиней і згодовування їх тваринам без належного знешкодження, а також ввезення в господарство свиней в інкубаційному періоді хвороби і вірусоносіїв, занос вірусу з грубими і соковитими кормами, зараженими дикими свинями.

З неблагополучних господарств ВКЧС вільно виноситься за 2нед. до появи хвороби і після початку її до встановлення діагнозу, коли тварин без обмеження вивозять на м`ясокомбінати і в інші хозяйства.Реалізація продуктів забою таких свиней - головна причина поширення чуми в сучасних умовах. Описана передача ВКЧС комарами. Приблизно з 100 комарів різних видів, виловлених в двох неблагополучних по КЧС фермах, готували суспензії і заражали поросят, В 8 випадках поросята захворювали. Патогенної Виявилася суспензія комарів родів Aedes, Anopheles, Psorophora і Culex .Наиболее важливим аспектом в циркуляції вірусу КЧС у природі є трансплацентарний передача польових і вакцинних штамів, вроджена персистентная КЧС-інфекція у плодів і новонароджених поросят. Простежується тісний зв`язок кругообігу вірусу з кругообігом репродуктивного циклу відтворення свиней. Циркуляція вірусу в популяції "свиноматка - плід -потомство" є основною сполучною ланкою природного кругообігу вірусу.

Природна вогнищевою. Природна вогнищевою КЧС серед кабанів становить небезпеку для промислового свинарства можливим залученням домашніх свиней в ланцюг циркуляції збудника. Поява природу осередків чуми в країні обумовлено низкою об`єктивних чинників:

- прямими і непрямими зв`язками між дикими і домашніми свинями внаслідок триваючого розселення кабанів. Зоологи відзначають, чтосеверная межа ареалу кабанів зрушила на північ європейської частини странидо лінії Беломорск - Березняки -Няндома - Котлас - Мураши. Активне расселеніекабана йде і в південних районах Росії при стійкій загальній чісленностіпоголовья-

- стійкістю збудника КЧС, тривалим вірусоносійство, різноманітністю шляхів його передачі від хворих кабанів здоровим при безпосередніх контактах або через об`єкти зовнішнього середовища, інфіковані виділеннями хворих, тривалим підтриманням вірусу в популяціях завдяки конгенітальной зараження плодів-

- ангропогенним впливом на середовище проживання кабанів, що призводить до використання ними кормів, харчових відходів, підстилки на полях і фермах і взаємному обміну вірулентним вірусом при наявності хворих серед диких і домашніх свіней-

- зв`язують факторами в поширенні збудника КЧС між окремими популяціями кабанів в результаті міграції тварин (добовий перехід досягає 10-20 км) .Не виключена в цьому процесі роль кровосисних членистоногих. Додатковим, нерідко важливим, сполучною ланкою з домашніми свинями можуть бути харчові відходи внаслідок використання людиною м`яса кабанів. Хвороба серед кабанів реєстрували з 1901р.

Спектр патогенності в природних умовах. До ВКЧС сприйнятливі домашні свині всіх порід і вікових груп, особливо чистопородні, а також дикі кабани. У лабораторних умовах шляхом тривалих серійних пасажів ВКЧС вдається адаптувати до організму кроликів.

Клінічні ознаки. Інкубаційний період залежно від вірулентності вірусу і чутливості тварин триває 3-9 да, рідше - 12, іноді - до 20 дн. КЧС може протікати понад гостро, гостро, підгостро і хронічно. Деякі дослідники виділяють особливу нервову форму, коли домінуючий симптом хвороби - ураження ЦНС.

Понад гострий перебіг хвороби спостерігається дуже рідко і у молодих тварин. Воно характеризується швидким перебігом, високою температурою (41-42 ° С), пригніченим станом, апатією, повною відсутністю апетиту і блювотою, прискореним серцебиттям і диханням, яскраво-червоними плямами на коже.Жівотние гинуть через 1-2 дня.

Гостре протягом частіше реєструється на початку епізоотії. Температура тіла підвищується до 40,5-41 ° С, тварини неохоче пересуваються, більше лежать. Спостерігають пригнічення, слабкість, відмова від корму. Розвивається гнійний кон`юнктивіт, з`являється блювота, запор, а потім пронос (фекалії іноді з домішкою крові). Сечовипускання утруднене. У деяких тварин сеча темно-коричневого кольору. Супоросні свині абортіруют.Нередко виникає слизисто-гнійний риніт, а в окремих тварин - носова кровотеча. На шкірі внутрішніх поверхонь стегон, живота, шиї і біля основи вушних раковин з`являються пустули, заповнені жовтуватим ексудатом, а дещо пізніше - точкові крововиливи, які в подальшому зливаються і утворюють темно-червоні плями, що не зникають при натисканні. Прогресуюча Слабкість супроводжується прискореним і утрудненим диханням, серцевою недостатністю, в результаті шкіра п`ятачка, вушних раковин, живота і кінцівок набуває синюшного забарвлення. Розвивається виражена лейкопенія і різкий зсув нейтрофільного ядра до мієлоцитів. Перед загибеллю температура знижується до 35-36 ° С. Зазвичай тварини гинуть на 7-10-й день.

Нервова форма відноситься до гострого перебігу хвороби і характеризується судорожним сіпанням окремих груп м`язів, Манежна рухами, паралічами задніх кінцівок, нервовим збудженням і апатією, сонливістю. Температура - в межах норми або підвищена до 40,5-41 ° С. Смерть настає досить швидко - через 24-48 годин.

Підгострий перебіг спостерігається нерідко після гострого перебігу, хвороба затягується до 3 тижнів. Температура тіла при підгострому перебігу трохи нижче, ніж при гострому. Одужання відзначається рідко. При затяжному перебігу чуми спостерігається нашарування вторинних бактеріальних інфекцій- сальмонельозу та пастереллеза. У разі ускладнення чуми сальмонельозом місцем локалізації вторинних поразок є шлунково-кишкового тракту (кишкова форма чуми). Запор, характерний для гострого перебігу чуми, змінюється виснажливим проносом зі смердючим запахом і домішками слизу, а іноді крові. Свині прогресивно худнуть і хвороба зазвичай закінчується загибеллю, рідше набуває хронічного перебігу.

При осложнененіі чуми пастереллезом ураження локалізуються в органах дихання (легенева форма). У тварин спостерігають утруднене дихання, кашель, іноді задуха, ознаки бронхопневмонії, слизисто-гнійні виділення ізноса- температура тіла вище 40 ° С. Хвороба найчастіше закінчується загибеллю тварини, нерідко спостерігають ускладнення чуми сальмонельозом і пастереллезомодно тимчасово (змішана форма). І в тому і в іншому випадку тварини гинуть.

Хронічний перебіг характеризується тривалим перебігом хвороби (кілька тижнів і навіть місяців), важким крупозно-діфтероідная ураженням шлунково-кишкового тракту, гнійно-фібринозним запаленням легенів і плевритом. У хворих тварин спостерігають зниження або втрату апетиту, кон`юнктивіт, пронос, іноді змінюється запором, анемію і прогресуюче ісхуданіе- свині перетворюються в замірків. Голова і хвіст у них опущені донизу, спина вигнута, загострений зад відвисає, задні кінцівки підігнуті під живіт. Тварини здебільшого лежать, зарившись у підстилку. Температура тіла підвищена, але нерідко підвищення температури відсутній. Часто відзначаються некрози кінчиків вух і хвоста. При хронічному перебігу з`являються сприятливі умови для розвитку вторинних інфекцій: сальмонельозу та пастереллеза. Однак часто стало з`являтися субклінічне і хронічний перебіг, що характеризується порушенням функції відтворення (безпліддя, аборти, мертворождаемость). Однією з причин, що сприяють появі цих форм, є розмноження хвороботворних штамів в недостатньо імунному організмі, зокрема, у щеплених інактивованих вакцінамі.Мертворождаемость, відставання в рості свідчать про зараження плодів через плаценту. Конгенітальной передача вірусу може супроводжуватися персистентной віремією протягом усього життя тварин або дуже тривалого періоду. У перші тижні життя у поросят, що народилися з персистентной віремією, не знаходять ніяких видимих ознак хвороби, але такі тварини передають вірус іншим. Водному посліді можуть бути поросята інфіковані і не інфіковані. Клінічно неможливо відрізнити поросят, що мають вірус в крові, від здорових жівотних.Только через деякий час спостерігали хронічний перебіг хвороби, відставання в рості і загибель у віці 3-8 тижнів. У поросят описаний вроджений тремор м`язів, пов`язаний з хронічним перебігом КЧС.

патологоанатомічні зміни. Патологоанатомічні зміни при КЧС дуже варіабельні і залежать від перебігу хвороби і наявності ускладнень секундарной інфекцією (сальмонельоз, пастерельоз та ін.)

Найбільш типові зміни зустрічаються у підсвинків і дорослих тварин. Гостра (септична) форма чуми протікає зазвичай без ускладнення вторинної інфекціей.На краях повік і в куточках очей утворюються коричневі скоринки. Кон`юнктива, слизові оболонки носа і рота, ціанотичні. Шкіра вух, шиї, живота, внутрішньої сторони стегон плямисто або дифузно забарвлені в червоно-червоний колір, видно точково-плямисті крововиливи. Звертає увагу виражені явища геморагічного діатезу в різних органах. Найбільш характерні зміни в лімфовузлах, селезінці і нирках. Лімфовузли, переважно голови і шиї, набряклі, соковиті, червоного кольору зовні і мармурового вигляду на розрізі. Селезінка обичнихразмеров або кілька зменшена, часто (в 40-50% випадків) з інфарктами покрали органу. Нирки зазвичай бліді, з численними точковими крововиливами в корковому шарі. Геморагії зустрічаються також у слизовій оболонці балії, сечоводів і сечового міхура. Наднирники набряклі, повнокровні. У серці і печінці іноді реєструють крововиливи. У шлунку і кишечнику гостре, катаральне, рідше крупозно-геморагічного запалення слизової оболонки з крововиливами, гіперплазія лімфоїдних (солітарних) фолікулів і пеєрових бляшок. Легкі повнокровні, іноді з вогнищами серозно-катаральної або крупозно-геморагічної пневмонії. Головний і спинний мозок і їх оболонки набряклі, повнокровні, мес.таміс точковимикрововиливами. При чумі, ускладненою пастереллезом (грудна форма), основні зміни спостерігають в органах грудної порожнини: крупозно-геморагічну пневмонію, множинні некрози, серозно-геморагічний або фібринозний плеврит і перикардит, інтенсивні крововиливи на серозних покривах грудної порожнини, а також на слизовій гортані і трахеї Зустрічаються крововиливу в шкірі, в нирках і в кишечнику, набухання і виразка фолікулів товстого кишечника.

При чумі, ускладненою сальмонельоз (кишкова форма), хвороба протікає переважно хронічно і характеризується виразково-некротичними процесами в травному тракті (глотці, мигдаликах, шлунку і кишечнику) Найбільш часто вражаються сліпа і ободова кишки, де знаходять діфтеріческіе "бутони" і виразки, рідше дифузне діфтеріческое запалення. Крім того, відзначають екзему і некрози шкіри, вогнища бронхопневмонії, фібринозний плеврит і перикардит, а також характерні для гострої чуми зміни в лімфоїдних органах і нирках

гістологічні зміни при КЧС неспецифічні. Велика частина процесів, на яких може базуватися гістологічна діагностика, дуже легко розпізнається на розтині (геморагічний лімфоденіт, інфаркт селезінки та ін.) Певну діагностичну цінність представляють лише зміни кровоносних судин, переважно в легенях, з якими пов`язане формування ряду характерних для чуми патологічних процесів в різних органах (лімфовузлах, селезінці, нирках, ЦНС та ін.) У лімфовузлах встановлюють повнокров`я судин, гомогенізацію, фибриноидное набухання і некроз стінок з суден, мікронекрози лімфоцитів, вогнищеві скупчення плазмоцитів, частіше по ходу судин. В селезінці, в зоні інфаркту, відзначають некроз тканини, а поза зоною -кровоізліянія, осередки каріорексису лімфоцитів і невеликі групи незрілих клітини лімфоїдного ряду В нирках зерниста дистрофія і некроз канальцевого епітелію, гломерулонефрит і крововиливи у вигляді петехій і екхімози у всіх шарах, а також в слизову балії сечового міхура. У більшості випадків (70-90%) в ЦНСобнаружівают негнійний лімфоцитарний енцефаломієліт, що характеризується наявність периваскулярних лімфоцитарні інфільтратів, осередкової проліферації клітини мікроглії (гліальних вузликів) і дистрофії гангліозних клітин

Патогенез. При КЧС патогенез необхідно розглядати в 2-хаспектах на клітинному рівні і на рівні цілого організму. Як встановлено, тип взаємодії вірусу з клітинами - персистентний, проникнення вірусу вклетку - рецептор-залежне. Незважаючи на продуктивну інфекцію і освіту інфекційного вірусу, збудник не робить ЦПД на заражену клітку і, отже, не ясний патогенетичний механізм in vitro. Система мононуклеарних фагоцитів (СМФ) забезпечує диссиминация вірусу в організмесвіней Вірусний патогенез на рівні цілого організму представляється так инфект (ВКЧС) - ворота інфекції (мигдалини і носоглотка) - первинна виремия (16-24 год після зараження) - максимальне накопичення ВКЧС в органах імунної системи (лімфовузли, селезінка, кістковий мозок, Пейєрових бляшки) На 4-6-е добу. - вторинна інфекція З 4-х діб. після інфікування - вірусовиделеніе з секретами і екскретів.

Патогенез КЧС можна розглядати як вірус індуковане порушення ферментних систем у хворих тварин. В організмі вірус розмножується в лімфоцитах лімфовузлів, селезінки, кісткового мозку і ендотелії кровоносних судин, викликаючи дистрофічні і некротичні зміни. Під впливом вірусу розвиваються некротичні зміни і основної речовини стінок кровоносних судин мікроциркулярного русла різних органів у вигляді мукоїдного і фібриноїдного набухання і некрозу, накопичення кислих мукополісахаридів В результаті цього сильно підвищується проникність стінок судин, що призводить довиникнення крововиливів, набряків, некродістрофіческіх і запальних процесів в різних тканинах і органах. Розмножуючись в клітинах імунної системи і викликаючи їх руйнування, вірус сильно знижує імунні властивості організму, що сприяє активації вторинної інфекції (пастерелл, сальмонел) і отягощеніюосновного процесу.

У патогенезі хвороби основними факторами її развітіяявляются хімотрипсин і інші субстанції нормальної тканини підшлункової железиХімотріпсін є одним з АГ, індукованих вірусом, тому КНС можнарозглядати як інфекцію, при якій відбувається розлад ферментнихсістем організму з підвищеною продукцією химотрипсина. Відомо, що макрофаги (МФ) є не тільки еффекгорной кліткою імунної системи, але ісекреторной, що володіє значним цитолітичним потенціалом (протеази ісвободние радикали кисню). Неспецифічна цитотоксичність МФ селезенкірезко зростає при персистенції вірусів в клітинах. Ингибиция фагоцітарнойфункціі і активація секреторної функції МФ під дією репродукції ВКЧС є характерним проявом прямого ЦПД збудника як in vitro, так і invivo. У той же час ВКЧС не робить прямого ЦПД на лімфоцити, так як все попиткіпоказать in vitro важкі порушення реактивності Т- і В-лімфоцитів імеліотріцательний результат. Тому ураження клітин (некроз лімфоцитів) при КЧСявляется результатом непрямої дії вірусу, і розвивається в результаті активації цитолітичного потенціалу заражених клітин-мішеней (МФ) прінепосредственним контакті з іншими клітинами (лімфоцитами, епітеліальними, ендотеліальними і ін.). Крім того, макроорганизм на відміну від культівіруемихклеток має систему кровообігу. Отже, циркулярні нарушеніякровообращенія, викликані непрямим вірусіндуцірованная поразкою стеноксосудов і запальної реакцією, грають важливу роль в патогенезі КЧС, викликаючи набряк, геморагії, інфаркти

Існують 6 концепцій патогенетичного механізму при КЧС:

КЧС як иммунопатологический процес циркулювання в кровікомплексов АТ-АГ і їх осідання на поверхні судин -

КЧС як процес порушення коагуляційних механізмів крові -

КЧС як надгостре паралімфобластіческій лейкоз,

КЧС як процес вірусіндуцірованная розлади ферментнихсістем організму з гіперпродукцією химотрипсина -

КЧС як процес віруспораженія наднирників сгіперпродукціей глюкокортикостероїдів з гиперплазированной корковою зони-

КЧС як процес вірусіндуцірованная активації клітин СМФі (або) нейтрофілів з гіперпродукцією ціготоксінов-протеаз і вільних радікаловкіслорода.

Клітини, заражені ВКЧС, несуть дуже мало вірусного АГ насвоіх поверхні, тому інфіковані клітини можуть уникати імунної атакіклеток господаря. Є ряд фактів, що підтверджують патогенетичне значеніепротеаз - виражене хворіють КЧС більш вгодовані тварини, які отримують богатийбелкамі корм (досліди на щурах показали, що у них при такому режимі кормленіяусілівается освіту протеаз). Встановлено різкі вікові колебаніяуровня химотрипсина в крові і відповідні зміни рівня лімфоцітов.Однім із шляхів, що призводять до розвитку уражень при КЧС, є порушення всистемі згортання крові, зокрема розвиток тромбоцитопенії і ізмененіекоагуляціоіних параметрів. Внаслідок максимальної активності коагуляціоннойсістеми розвивається синдром дисиміновані внутрішньосудинного свертиваніякрові, що приводить до появи геморагій. Одна з теорій полягає в тому, чтопатологіческіе процеси і летальний результат визначаються руйнуванням По-лімфоцітовілі В-лімфобластів в зародкових центрах лімфовузлів.

діагноз ставлять наосновании епізоотологічних даних, симптомів хвороби, патологоанатоміческіхізмененій і результатів лабораторних досліджень. Епізоотичні, клінічні патологоанатомічні дані залежать від сприйнятливості свиней, вірулентностіштамма і комплексу заходів з профілактики КЧС.

Якщо в осередку штам вірусу отруйний, поголів`я свиней неімунного, то хвороба характеризується високою контагіозністю, большейсмертностью, гіпертермією, геморагічними ураженнями шкірного покриву, ознаками ураження органів шлунково-кишкового тракту і центральної нервової системи. Звертають увагу вираженнийгеморрагіческій діатез в різних органах, мармуровість лімфовузлів, інфарктиселезенкі, крововиливи в нирках на тлі їх анемії, катарально-геморрагіческійгастроентеріт, лімфоцитарний енцефаломієліт. Однак часта вакцинація свінейпротів чуми створює імунний фон, що впливає на симптоми хвороби і характерпатоморфологіческіх змін. При хронічному перебігу характерними ізмененіяміявляются вогнищевий дифтеритический наліт (бутони), коричнева екзема, фібрінознийплевріт і перикардит, некроз мигдалин. Хронічна хвороба часто протікає нафоне інших інфекцій. Правильний діагноз може бути поставлений тольколабораторньмі методами.

Експрес-методи виявлення вірусу КЧС. Для бистрогообнаруженія ВКЧС в тканинах за допомогою ПЦР із зразків тканин тварин фенольнимметодом виділяють препарати РНК, піддають зворотної транскрипції іампліфіціруют в ПНР. Використовувані "гніздові" праймери позволяютампліфіціровать різні ізоляти ВКЧС. ПЛР має високу чутливість іспеціфічностью і дозволяє диференціювати різні пестівіруси.

Виділення вірусу. Взяття і підготовка матеріалу. Для виділення вірусу беруть проби крові, шматочки селезінки, мигдаликів, лімфовузлів, грудної кістки, нирок і легень від 2-3 тварин в перші 2 години після загибелі іліубоя хворих в агональному стані. Матеріал відбирають в стерильні флакони, закривають гумовими пробками, флакони обробляють зовні 5% -ним р-ромхлораміна або освітленим 20% -ним розчином хлорного вапна, обгортають марлею, змоченою дезинфікуючим розчином, і поміщають в поліетиленовий пакет. Взятийпатматеріал поміщають в термос з льодом, опечатують і відправляють з нарочним влабораторію з відповідним супровідним документом. У лабораторії ізкаждой проби готують 20% -ву суспензію на 0,85% -ному розчині NaCI, яку тріждизаморажівают і розморожують, центрифугують при 3-4 тис. Хв-1 20-30 мін.Надосадочную рідина обробляють антибіотиками 1ч при 37 ° З і використовують длявиделенія вірусу.

Індикація та ідентифікація вірусу Гістологіческіеісследованія. Проводять з метою виявлення специфічних змін нервнихтканей. Від полеглих або убитих свиней беруть шматочки півкулі головного мозку, мозочка, рогів Аммона, спинного мозку в різних ділянках. Гістологіческіепрепарати фарбують гематоксилін-еозином. У більшості випадків (70-93%) в ЦНСобнаружівают негнійний лімфоцитарним енцефаломієліт, характерізующійсяперіваскулярнимі лімфоцітарньмі інфільтратами, осередкової проліферації клетокмікрогліі (гліальних вузликів) і дистрофію гангаіозних клітин. У зрізах, приготованих з лімфовузлів, серцевого м`яза і печінки, можна виявити прісутствіеацідофільних внутрішньоядерних тілець-включень, кілька менших, ніж ядерця. Влімфоузлах їх знаходять на 6-12-й день після зараження.

ВКЧС має виражену гематотропізмом щодо кісткового мозку, що містить більшу кількість бластних клітин, ніж лімфовузли і селезінка. Тому кістковий мозок уражається першим- ингибируются Міелопоетіческіе і ерітропоетіческой клітини і проліферують великі клітини сбазофільной цитоплазмою. Поряд з цим виявляють картину глибокого цітолізаі дистрофію лімфопоетіческіх органів.

При підозрі на чуму для уточнення діагнозу кілька важкохворих тварин вбивають і досліджують мазки з кісткового мозку груднойклеткі.

Біопроба. З благополучного щодо інфекційних болезнямхозяйства беруть поросят у віці 2-3 міс .. масою 20-30 кг. Як матеріалаіспользуют 10% -ву суспензію, приготовану з органів (селезінки, лімфовузлів, кісткового мозку) або крові від загиблих тварин. Суспензію обрабативаютантібіотікамі, витримують не менше 4 год при 4 ° С, центрифугують і надосадочнуюжідкость використовують для зараження тварин. Трьом поросятам вводять підшкірно по 1 мл крові або по 2 мл суспензії органів. Двом тваринам досліджуваний матеріал неінокуліруют, містять їх окремо для контролю. Двом поросятам, імунним кВКЧС, вводять досліджуваний матеріал в тих же дозах з метою діфференціальнойдіагностікі щодо АЧС. За всіма тваринами спостерігають 21 день і ежедневноізмеряют температуру тіла.

Діагноз вважають позитивним, якщо 2 з 3-х неіммуннихпоросят хворіють, проявляючи симптоми хвороби, і гинуть, а 2 іммуннихостаются здоровими або виявляють незначні і короткочасні (1-4 дн.) Ознаки хвороби слабкої інтенсивності (підвищення температури тіла не више41 ° С). Однак слід мати на увазі, що при відсутності реакції у воспріімчівихжівотних або в разі її недостатньої вираженості, не можна з уверенностьюісключіть присутність вірусу в досліджуваному матеріалі. Негативний результатзараженія може бути наслідком або занадто малу кількість в ньому вірусу, або слабкою вірулентності останнього. Тому наступним кроком являетсяповторное, через 3-6 тижні після інокуляції досліджуваного матеріалу, зараження (реінфекція) піддослідних свиней на цей раз вірусом зі свідомо ізвестнойвірулентностью. Відсутність у тварин реакції на це зараження свідчите придбанні ними імунітету в результаті першої інокуляції (бессімптомногопереболеванія) і вказує на присутність вірусу в досліджуваному матеріале.Одновременно з проведенням 2 проби заражають додатково 2 воспріімчівихпоросят (контроль) вірусом, використаним для реинфекции.

Іноді біологічна проба себе не виправдовує або дає неясні результати при виділенні штамів вірусу, що викликають легкоезаболеваніе. Такі штами у інокульованої поросят викликають хроніческуюболезнь. Справа ускладнюється тим, що штами зі слабкою вірулентністю можуть необладать імунізують властивостями, а це не дозволяє уточнити діагноз прііспользованіі додаткового контрольного зараження вірулентним штамом (реинфекции). При діагностиці захворювання, зумовленого такими штамами могутпонадобіться молодші тварини та додаткові пасажі для повишеніявірулентності.

Запропоновано шкала оцінки вірулентності польових штамів ВКЧС:

- слабовірулентнимі (патогенні лише для поросят-сосунов) неіммунізірующіе штами. Поросята-сисуни хворіють в перші дні життя і смертному їх велика, поросята-отьемиші (12-15 кг) реагують тільки в определенниедні підйомом температури тіла, що не набуваючи іммунітета-

- слабовірулентнимі (патогенні для молодих тварин) імунізують штами. У тварин масою 15-20 кг розвивається хроніческаяболезнь, підсвинки масою 35 кг реагують підйомом температури тіла, продолжающімсянесколько днів. На секції знаходять незначні точечниекровоізліянія. Тварини набувають іммунітет-

- сильно вірулентні штами викликають у тварин масою 30 кг гостре захворювання, смертність 40% і більше. На розтині характерні геморагічні зміни.

Тест модуляції фагоцитарної активності макрофагів. Дефіцітфагоцітарной функції призводить до порушення локальних імунних реакцій зрозвитком запальних процесів на слизових оболонках. При КЧС проісходітлокалізація фагоцитарної функції лейкоцитів: при репродукції вакцинного шт.ЛК-ВНІВВіМ знижується відсоток і індекс фагоцитозу нейтрофілів і макрофагів, Апрі репродукції вирулентного вірусу шт. Ши-Мінь підвищується відсоток і індексфагоцітоза нейтрофілів і знижується такої у макрофагів. При КЧС in vivo і invitro фагоцитарна активність лейкоцитів крові короткочасно (до 4 діб.) Знижується при інфікуванні вакцинним штамом і підвищується у макрофагів пріінфіцірованіі вірулентним штамом ВКЧС. Встановлений в інфіцірованнихклетках-мішенях цитопатичної ефект, що виражається в модуляції фагоцітарнойактівності свинячих макрофагів, використовують в діагностиці КЧС ..

серологічна ідентифікація

Імунофлюоресценція. З проб органів (лімфовузли, селезінка, нирки, мигдалини) готують заморожені зрізи. З проб кісткового мозку ілейкоцітарного концентрату - мазки. Для приготування останніх беруть груднуюкость, роблять поздовжній розріз і виймають червоний кістковий мозок, з которогоделают кілька мазків. Для приготування мазків з лейкоцитарного концентратаот хворих або підозрюваних у захворюванні свиней беруть 15 мл крові сантікоагулянтом, енергійно струшують, залишають на 1 год при комнатнойтемпературе, потім відбирають плазму з лейкоцитами і центрифугують 10 хв прі1000 хв-1, з осаду лейкоцитів (білуватий осад) роблять 2-3 мазка.Пріготовленние препарати (зрізи і мазки) фіксують в охолодженому ацетоні 10хв, після випаровування ацетону промивають 15-20 хв в ФБР рН 7,2 і забарвлюють прі37 ° С 30 хв кон`югатом в робочому розведенні, до якого додані т красітельЕванса в співвідношенні: 3 частини кон`югату і 1 частина барвника, потім препаратпромивают в фосфатному буфері і залишають на 10 хв в дистильованої воде.После часткового підсушування на повітрі на препарат наносять забуференнийгліцерін (9 частин гліцерину і 1 частина ФБР рН 8), покривають покривним склом імікроскопіруют. Аналогічно ставлять контролі: а) досліджуваний матеріал і нормальний кон`югат з барвником Еванса- б) неінфікований матеріал і специфічний кон`югат з барвником Еванса. Прімікроскопіі фон препарату флуоресціює червоно-оранжевим кольором, ядра клетоктемние, специфічне світіння характеризується зеленим кольором цитоплазми. У мазкахіз червоного кісткового мозку і лейкоцитарного концентрату спеціфіческаяфлюоресценція відрізняється великою яскравістю і кількістю флюоресцірующіхклеток. Специфічне свічення в цитоплазмі навіть в окремих клеткахпрепаратов, отриманих від підозрілих на захворювання тварин, вказує наналічіе вірусу КЧС. У контрольних препаратах подібного свічення не маєбути.

Зазначений метод відрізняється специфічністю і бистротой.Однако щоб уникнути похибок методу при впровадженні його в лабораторііследует мати на увазі, що специфічність результатів залежить від наступних факторів: якості сироватки-маркера (вона повинна мати високі титри, битьмоновалентной, отриманої від свиней, що не оброблених іншими АГ ), качестваісследуемого матеріалу (повинен бути відібраний не пізніш 2-3 ч після смертіжівотного, фіксований в ацетоні або заморожуванням і відразу ж відправлений на дослідження) .В супровідному листі необ ходимо вказувати клінічну і епізоотологіческуюхарактерістіку хвороби, дати і назви щеплень. При обліку реакції следуетзнать, що вакцинний вірус зберігається в вакцинованих свинях до 15 дн послевакцінаціі і в ІФ недиференціюється від польового вірусу.

РНГА. Для виявлення АГ вірусу в патологічному матеріалеіз органів і тканин свиней використовують такі компоненти: а) АТ-еритроцитарний діагностікум- б) специфічний АГ - вірус-вакцина КЧС- в) нормальний (контрольний) АГ г) 1% -ний розчин нормальної кінської сироватки взабуференном фізіологічному розчині з рН 7,2 д) фор-малінізірованние ітанізірованние еритроцити барана- е) досліджуваний матеріал.

РНГА ставлять мікрометодом в обсязі 0,075 мл з помощьюаппарата Такач або Тітертек. Готують дворазові розведення ісследуемогоматеріала (від 1: 2 до 1: 512) в обсязі 0,05 мл і такі ж розведення контрольнихАГ (специфічного і нормального). Потім в усі ямочки вносять 0,025 мл 3% -нойсуспензіі еритроцитарного диагностикума. Крім того, ставлять дополнітельноконтролі- а) 0,05 мл 1% -ного розчину нормальної сироватки коня і 0,025 млерітроцітарного діагностікума- б) 0,05 мл досліджуваного матеріалу в разведеніяхі 0,025 мл формалінізірованних і танізірованних еритроцитів. Після етогопластінкі струшують і залишають на 1,5-2 ч при кімнатній температурі. Учетпроводят в хрестах. РНГА вважають позитивною при виявленні аглютинації неменш ніж на три хрести в розведеннях 1: 8 і вище.

РДП і ІЕОФ. Реакції розрізняються методами отримання лінійпреціпітаціі: в РДП це відбувається за допомогою вільної дифузії розчинів АГ і ATіз лунок в агарових гелі рівномірно на всі боки, а в ІЕОФ АГ і AT двіжутсястрого назустріч один одному під дією електричного поля, в результатічого збільшується їх концентрація в місці зустрічі та там утворюються болеевираженние смуги преципітації.

Для постановки ІЕОФ необхідний спеціальний прилад дляелектрофореза, що дає регульоване напруга постійного струму до 300В. ІЕОФ внесколько разів чутливіші методу РДП, вимагає незначного колічестваматеріала і дозволяє отримувати результати через 30 хв. Метод стандартизований, описана методика приготування агарозного гелю. Він використовується для виявленіяАГ ВКЧС в мезентеріальних лімфовузлах і суспензії тканини підшлункової залози пріклініческіх випадках болезні.Данний метод дозволяє виявляти і специфічні AT.Метод швидкий, легко здійснимо і більш чутливий для лабораторнойдіагностікі КЧС, ніж РДП.

Серодиагностика і ретроспективна діагностика

В даний час в лабораторній діагностиці КЧСіспользуются три методи виявлення специфічних AT до ВКЧС: реакціянейтралізаціі флюоресцирующих мікробляшек (РНФБ), реакція непрямої ІФ інепрямой варіант твердофазного ІФА. Найбільш ефективними методами обнаруженіяспеціфіческіх AT до ВКЧС є РНФБ і ІФА. Ефективність виявлення AT кВКЧС в ІФА у порівнянні з РНФБ становила 96,5%. На підставі цих даннихнепрямой варіант ІФА рекомендований для виявлення специфічних AT до ВКЧ.

Ніф. Ніф застосовується для виявлення та титрування AT всиворотках крові перехворілих свиней. Використовують заражені вірусомперевіваемие клітини (РК-15) на скельцях, на яких титрують іспитуемиесивороткі в 2-кратних розведеннях від 1:20 до 1: 640 в непрямий ІФ пообщепрінятой методикою з використанням в другому етапі реакції антісвіногоФІТЦ-Ig. Титром AT до КЧС вважають останнє розведення сироватки, обеспечівающеезеленое світіння (на 2 хрести) дифузного цитоплазматического АГ вірусу при відсутності подібного світіння в контролях з інтактними тест-об`єктами і нормальнойсвіной сироваткою.

Реакція нейтралізації флюоресцирующих бляшок (РНФБ). Вкачестве чутливої системи необхідно використовувати перевивали культуруклеток РК-15, вирощену на покривних стеклах в пробірках. РНФБ проводятмікрометодом, використовуючи пластикові панелі Titertek. Суспензію клітин (в 1 мл10-800 тис. Клітин) готують на середовищі Голка (MEM) з 5% фетальної сироватки кровіКРС з додаванням буфера HEPES. Постановка мікрометодом РНФБ болеепроізводітельна, ніж використання Макрометод (28). Даний метод може успешнопріменяться і для титрування специфічних AT. Проби сироваток крові беруть отжівотних не раніше 15 днів. після клінічного одужання. Передіспользованіем їх інактивують при 56 ° С 30 хв. Сироватки розводять від 1: 2 до1: 2560 і змішують з рівним об`ємом вакцинного вірусу в кількості 100 ККІД5о (клітинно-культуральних інфекційних доз), струшують і витримують 60 хв прі37 ° С. Кожне розведення сироватки з вірусом вносять по 0,4 мл в 4 пробірки скультурой клітин РК-15 на скельцях. Адсорбують 2 ч при 37 ° С. Смесьсиворотка-вірус зливають, відмивають клітини середовищем, заливають 2 мл поддержівающейсреди і інкубують при 37 ° С. Реакцію враховують через 48 год інкубації. Препаративинімают з пробірок, споліскують в 0,01 М ФБР рН 7,2-7,4 і обробляють, какуказано вище. Реакція супроводжується відповідними контролями (суміш вірусасо середовищем, гіперімунною і нормальної сироватками і незаражених культураклеток). Відсутність флюоресцирующих мікробляшек (при наявності їх в контролевіруса в суміші з живильним середовищем і нормальної сироваткою) в препаратахВКЧС, оброблених гіперімунною і випробуваними сироватками в розведенні 1: 2 і вище, вказує на наявність в матеріалах специфічних AT. Титром AT вважають топредельное розведення сироватки, при якому спостерігається повне подавленіеобразованія флюоресцирующих мікробляшек.

Щоб уникнути отримання помилкових результатів при іспользованіікультури клітин необхідно додавати в середу бичачу сироватку, вільну отвіруса діареї великої рогатої худоби та AT. BHA виявляються через 21 день після зараженія.Обнаруженіе їх за допомогою непрямої ІФ в культурі клітин широко застосовували в СШАна останніх етапах програми викорінення хвороби. Однак при інтерпретаціірезультатов слід враховувати часті випадки инаппарантной інфекції у свиней, викликаної серологічно родинним вірусом діареї великої рогатої худоби, тому всеположітельно реагують сироватки свиней необхідно досліджувати і на вірусдіареі.

Для масового обстеження свиней на субклиническую інфекціюКЧС в ФРН запропонований тест, що поєднує РН з ІФ. Як тест-сістемиіспользуют культуру клітин РК-15. Якщо в однієї або декількох свіноматокотдельного стада в сироватці крові виявляють BHA, всіх поросят вбивають зподальшим дослідженням органів ІФ.

При дослідженні проб сироваток з неблагополучних хозяйствв РН (з 200-300 БОЮ патогенного шт. Альфорт 331) до 50% їх оказалосьположітельнимі. Наявність AT свідчило про носійство вірусу. Віруссмоглі виділити тільки у молодих поросят.

Описана вдосконалена методика виявлення BHA до ВКЧС, в якої постановка тесту значно полегшена за рахунок іспользованіяцітолітіческого штаму вірусу, виділеного з персистентно інфіцірованнойперевіваемой культури клітин JB-RS-2 і індуковані чітке ЦПД в несколькіхперевіваемих лініях клітин нирки поросяти. Реакцію ставлять в культурі клетокРК-15 на мікропанелях при 38 ° С в термостатах з подачею СО2. Повоспроізводімості і чутливості методика не поступається реакції з іспользованіемметода ІФ AT, але вимагає значно меншого праці. Пропонований методобладает низку переваг: виключає необхідність використання ІФ учетрезультатов можна проводити без мікроскопа- реакцію ставлять мікрометодом-який використовується вірус аттенуированного. Для постановки РН необхідно спочатку провестітітрованіе ВКЧС.

ІЕОФ. Використовується в 1% -ної агарози як діагностичний прівиявленіі AT до ВКЧС в сироватках заражених свиней. Для дослідження пріменяетсяАГ, екстрагований з заражених ВКЧС клітин РК-15. Показано, що етоткультуральний АГ ВКЧС ідентичний Преципітуючих АГ вірусу, екстрагірованногоіз тканини селезінки заражених свиней. Виявлено, що ПА до ВКЧС з`являються всиворотках через 2-3 тижнів. після зараження тварин слабовірулентнимі штаммаміілі модифікованим живим вакцинним штамом. Виявлено, що метод ІЕОФ в 2-16раз чутливіші, ніж іммунодіффузія в агарових гелі. Незважаючи на меншу егочувствітельность в порівнянні з РН, результати, отримані за допомогою ІЕОФ, добре узгоджуються з результатами, отриманими методом подавленіябляшкообразованія. Вважається, що ПА до ВКЧС можуть персистувати до 3 років после1-кратної вакцинації шт. С. Методом ІЕОФ неможливо було диференціювати AT кВКЧС від AT до вірусу діареї КРС- при отриманні позитивних результатовнеобходімо поєднувати його з РН.

ІФА в непрямий модифікації. На мілліпоровскіе фільтри (Тіпон, діаметр пір 0,3 мм), діаметр яких дорівнює 0,6 см, змочені розчином АГ ВКЧС, наносять свинячі сироватки. Потім фільтри инкубируют вр-ре кролячого IgG (проти IgG свині), міченого пероксидазою хрону RZ = 3,0.Актівность пов`язаної пероксидази визначають в розчині субстрата3,3-діамінобензідіна. Дослідні зразки офарблювалися в коричневий колір, контрольні залишалися безбарвними. Реакція громіздка.

ELISA. Розроблено метод визначення AT до ВКЧС намікроплатах, піддається автоматичному аналізу. Описана методика полученіяочіщенного і концентрованого АГ для тесту ELISA з шт. Альфорт, размноженногов культурі клітин РК-15. Результати ELISA і РН близькі. ELISA легкий Ввиполненіе, дешевий, дозволяє швидко досліджувати велику кількість зразків, високочутливий і рекомендований як методу оцінки прікрупномасштабних обстеженнях.

З використанням імуноглобулінів баранів, інфіцірованнихВКЧС, розроблена технологія виготовлення ІФ-кон`югатів, придатних длявиявленія вірусного АГ в патологічному матеріалі. При постмортальнойдіагностіке вірус виявляється зі 100% ефективністю без біологіческогонакопленія. При експериментальному зараженні вірус в пробах сечі і кровіобнаружівалі через 8-10 год, при контактному зараженні - через 72-96 ч.Положітельние результати при індикації ВКЧС в об`єктах ветеринарного нагляду (зерно, грунт, вода) отримані при концентрації вірусу, що перевищує 100 ВД. Показаноуспешное застосування ІФА для виявлення ВКЧС в культурі клітин РК-15.

Описано отримання монАТ для діагностики КЧС на мишах лінііBALB / c 4-кратно імунізованих ВКЧС (шт.Альфорт). Клітини селезінки мишей "зливали" з мієломний клітинами Sp2 / 0. Отримані гібрідомикультівіровалі в 20% середовищі ДМЕМ Ну-Нт при 37 ° С в атмосфері 5% С02.Продуцірующую специфічні AT культуру двічі субклоніровалі і послеопределенія изотипа AT інокулював интраперитонеально мишам BALB / c.Образующаяся асцитної рідина містила високі концентрації монАТ, коториепосле відповідного очищення кон`югованого пероксидазой хрону.

Розроблено спосіб виготовлення імуноферментних коньюгатовдля ІФА з використанням монАТ до ВКЧС зі збереженням активності ферменту і високий специфічною активністю імуноглобуліну, а також методфлюоресцірующіх зондів (МФЗ), який не поступався за чутливості іспеціфічності МФА. Розроблено метод виявлення ВКЧС методом молекулярної гібридизації ПЛР.

Диференціальна діагностика

КЧС необхідно відрізняти від африканської чуми, пастерельозу, сальмонельозу, пики, БА, ВД-БС, парагрипу та грипу.

При африканської чуми яскравіше виражений геморагічний діатез, збільшена і розм`якшена селезінка, повнокров`я і крововиливу в нирках. Чащепоражаются, маючи вигляд кров`яних згустків, портальні, ниркові і брижеечниелімфоузли. Сильно виражений набряк інтерстиціальної тканини легенів, скупчення вгрудной порожнини кров`яною рідини. Рідко відзначають інфаркт селезінки, постійно-тотальний розпад лімфоцитів і тканин лімфоїдних органів. Для діфференціацііставят тест перехресного імунітету, тест гемадсорбції і РИФ. Пастереллез, какправіло, не приймає характеру епізоотії, вражає переважно взрослихжівотних. Для нього характерні набряк підшкірної клітковини подчелюстногопространства, що поширюється на шию і глотку, серозний лімфаденіт, фібринозно-некротизуючий пневмонія, слабо виражений геморагічний діатез.Кроме того, виявляють збудника при бактеріологічному і біологіческомісследованіях. Рожа зазвичай виникає в літній період року і характерізуетсязастойнимі явищами шкіри (бешихове еритема) і у внутрішніх органах, збільшенням селезінки, гломерулонефрит і катаральним гастроентеритом. Пику свінейдіагностіруют виділенням збудника. Не виключено одночасне протягом чуми пики. В цьому випадку діагноз ставлять на підставі біологічної проби на чуму бактеріологічного дослідження на пику. Сальмонельоз спостерігають спорадичні ензоотичних серед молодняка 1-5-міс. віку. Характеризується слабимгеморрагіческім діатезом, розвитком в товстому кишечнику плоских пухких струпьеві виразок, а не "бутонів", вогнищевими некрозами печінки. Результатибактеріологіческіх досліджень є також підставою для діфференціацііКЧС. Грип і парагрип свиней виключаються вирусологическим ісследованіемматеріала, взятого з верхніх дихальних шляхів (наявність ГА віруссодержащегоматеріала в перших пасажах на КЕ, гемадсорбції в культурі тканини, цитоплазматических включень при ри-ноцітоскопіі). Хвороба Ауєскі чащенаблюдается серед поросят. Проводять вірусологічні дослідження та біопробуна кроликах. Вірусну діарею уінфіцірованних встановлюють за допомогою ПЛР, оскільки великий неструктурнийпротеін пестівірусов 125 кБ високо консервативний, а мажорний протеїн конвертаgm53 чітко різниться у ВКЧС і діареї ВРХ.

Імунітет іспецифічні профілактика. Тварини-реконвалесценти набувають стойкійіммунітет, що триває кілька років. Пасивний імунітет нетривалий -до 10-12 днів.

Застосування живих вакцин. Імунітет при КЧС обумовлений ВНА.Іммунние реакції, спрямовані на цитолиз інфікованих клітин, не "працюють" при КЧС через відсутність експресії вірус специфічних білків на клітинної поверхні. Однак формування резистентності до зараження вакцинованих свиней відбувається до виявлення ВНА. Лейкоцити і лімфоцити імунізованих свиней здатні лизировать аутогенні клітини-мішені (лейкоцити), інтегровані віріони КЧС. Однак ці ж клітини або зовсім не викликали цитолиз не заражених лейкоцитів, або ціалізуватися їх в меншій мірі. Тому цілком можливо, що в захисті від КЧС поряд з нейтралізацією вірусу AT важнуюроль грають імунологічні реакції, опосередковувані клітинами, зокрема ЕК (природні кілери) і ЦТЛ (цитотоксичні лімфоцити). З 70-х рр. в арсеналі засобів специфічної профілактики КЧС перший мес.то займають живі вакцини ізшт. До і ЛК-ВНІІВВіМ. Краща з вітчизняних - вакцина ЛК-ВНІІВВіМ, отримана на основі шт. До ВКЧС, який репродукується в гетерологичной системі - культурі клітин тестікулдрной тканини ягнят. Препарат має високу імуногенність іполностью позбавлений вірусних контамінантів, патогенних для свиней. Вакцина не поступається за активністю кращим світовим аналогам - вірус вакцини GPE (Японія) іPhiverval (Франція), а й перевершує їх по універсальності застосування і потенційної нешкідливості. Всі характеристики вірус-вакцини ЛК-ВНІІВВіМ відповідають вимогам Європейської фармакопеї та загальновизнаним світовим стандартам. За допомогою живий вірус-вакцини ЛК-ВНІІВВіМ можна створювати специфічний захист від захворювання і загибелі 100% вакцинованих свиней вже через 48 годин після 1-кратного внутрішньом`язового введення її в дозі 6,0 lgІмД50 / гол. Вакцина може бути з успіхом використана для обриву інфекції в неблагополучних господарствах і до мінімуму скоротити економічні збитки. Вакцина з шт. До раніше репродукувати в організмі кроликів, в даний час її розмножують в культурі клітин нирки ембріона свині. У ВНІІВВіМ розроблений і випробуваний з позитивним ефектом спосіб пероральної вакцинації новонароджених поросят проти КЧС. Єдиним і обов`язковою умовою є вакцинація той час після народження до контакту з інфікованою середовищем і до 1-го прийому молозіва.Поросят допускають до сосок матки не раніше, ніж через 30 хв після вакцинація останнього поросяти. В силу будови плаценти жоден клас AT, ціркулірующіхв організмі свиноматки, не передається плоду. Поросята народжуються від іммуннойсвіноматкі абсолютно інтактними, практично стерильними й ім-нологіческікомпетентнимі. Вакцинувати підсисних поросят, які вже отримали молозівоіммунних свиноматок, безглуздо, так як при наявності колостральной ATпоствакцінальний імунітет у поросят не формується. Вимушена вакцінаціяпоросят окремого віку чревата ризиком провокації інфекції, так какнейтралізуя залишки материнських AT, вакцина позбавляє поросят возможностізащіщаться в інфікованої середовищі. Отже, вакцинувати поросят доот`ема ще рано, а після відлучення вже пізно. Тому надзвичайно важливо поросенкавакцініровать перорально до смоктання, тобто майже відразу після народження ідо контакту його з інфікованою середовищем, попереджуючи таким чином внедреніепатогенного вірусу.

При пероральному введенні вакцинний вірус проникає в організм через природні ворота інфекції, де організм біологіческіподготовлен до зустрічі з агентом, завдяки потужним лімфоїдним образованіямглоточного кільця, які відразу ж запускають імунну процес. Крім того, вакціннийвірус, блокуючи чутливі рецептори, підпорядковуючи метаболізм клітини і ееенергетіческій потенціал регулюючого впливу генома вакцинного вірусу, лішаетполевой вірус обов`язкових умов, необхідних для проникнення ірепродукціі. Спрацьовує механізм попередження. Таким чином, ні последующееінфіцірованіе поросят польовим вірусом, ні масоване надходження з молозівомAT не здатні перервати або вплинути на формування повноцінного (ссекреторним компонентом) імунітету проти КЧС. Встановлено, що 1-кратнойпероральной вакцинації новонароджених поросят живий вірус-вакциною (ЛК-ВНІІВВіМ) досить, щоб захистити їх від захворювання протягом усього технологіческогоцікла вирощування аж до здачі на м`ясокомбінат.

Застосування інактивованих вакцин. У минулі годипрофілактіка КЧС грунтувалася на застосуванні крісталлвіолетвакціни, яка, незважаючи на ряд недоліків, свого часу грала позитивну роль в санацііхозяйств від даної інфекції. З 1967 року цей препарат в господарствах Російської Федерації Істран СНД не застосовується, хоча думки про можливість отримання інактівірованногоі абсолютно нешкідливого препарату продовжують підтримуватися. Так, наприклад, Р.Д.Устаров і В.І.Жестерев і співавт. показали, що ВКЧС, вирощений любимітехнологіческімі прийомами, надійно інактивувався сірчанокислої міддю (3-5 мМ) при 37 ° С протягом 98 чс збереженням іммуногеіних властивостей. Використання інших інактівантов (глутаральдегід, димер етиленіміну, тритон Х-100) не забезпечувало полученіяіммуногенних препаратів в нативному вигляді (максимальна доза АГ). Авторомразработана інактивована вакцина проти КЧС, що містить культуральнийматеріал вирулентного шт. Ши-Мінь, сернокислую мідь як інактіванта ігідроокісь алюмінію. Вакцина створювала 100% -ву захист щеплених тварин отконтрольного зараження вірулентним вірусом (1000-10000 ЛДдо), в той час каканалогічние препарати з шт. ЛК забезпечували, в цілому, 30% -нуюзащіту. У Франції розроблена інактивована вакцина проти КЧС. Культуральнийвірус інактивувати глутаральдегідом (0,01-0,001% -іим при 25-35 ° С в теченіе4-7 ч), а потім емульгованих в масляний ад`ювантна. У ВНІТІБП були получениопитние зразки інактивованої вакцини проти КЧС з шт. Гудзон, виращенногов культурах клітин РК-15, ПЕКр і первинній культурі клітин нирки поросенка.Вірус інактивувати етиленіміну і емульгованих з різними масляниміад`ювантамі. Вакцина забезпечувала 75-100% -ву захист в експеріментальнихусловіях при контрольному зараженні / 10000 ЛД5о. Є патент на вакцину, яка містить поліпептид вірусу КЧС.

Про генно-інженерної вакцини проти КЧС. У 1991 р було здійснено вбудовування генів гликопротеинов ВКЧС в вектор (вірус осповакціни). Отриманий Рекомбінантний вірус виявився високоімуногенний. На поверхні клітин заражених ВКЧС виявлені глікопротеїни ЕО і Е2. Стійкими до контрольного зараження опинилися тільки ті тварини, які були щеплені рекомбінантним вірусом вакцини, експресуючих ЕО і (або) Е2. В даний час отримано рекомбінатние аттенуіровані вірус БА, експресуючий gp55 (E2) вірусу КЧС.Он викликав у свиней виражений імунітет проти обох вірусів. Імунізація Свиней білками ЕО і Е2, отриманими в Оспен-бакуловірусної системах, також захищала свиней від летальної інфекції вірусом КЧС.

Серологічна оцінка поствакцинального імунітету. Показана Можливість оцінки поствакцинального імунітету по тим же тестів. Наприклад, за допомогою РДСК виявляли AT в 45% випадків в сироватці свиней, імунізованих вакциною АСВ (на 6-7-й день після вакцинації). При імунізації живими вакцинами ВНА в крові з`являються на 7-10-й день, досягаючи піку (1: 128 і вище) до кінця місяця, і зберігаються на високому рівні протягом усього період несприйнятливості. Вакцинацію можна вважати успішною, якщо титр AT в РН флюоресцирующих мікробляшек, через 2-5 міс .. після імунізації, складає 1:20 і вище. Серологічне обстеження поголів`я свиней, вакцинованих проти КЧС, дозволяє оцінювати ефективність проведеної вакцинації. Оцінка Напруженості поствакцинального імунітету проводиться за титром AT. Так титр AT1: 32 і вище свідчить про напружений імунітет. У молодняку до 2-3-місяців імунітет не напружений і титр AT в РНГА становив 1: 4-1: 8. Через 20 днів. після вакцинації поросят вірус-вакциною титр ВНА поступово підвищувався до максимального рівня до 60-го дня, клітинної реакції не відзначено. У 3-х група поросят, щеплених штамами, що викликають хронічну чуму, ВНА не виявлено, клітинну імунну відповідь спостерігали у 4 тварин з 9. Найвищий клітинну імунну відповідь була у поросят, імунізованих інактивованих вірусом. Після Контрольного зараження вірулентним вірусом вижили всі тварини.

У поросят, відібраних в 7-денному віці від імунних тварин, пасивний захист може тривати понад 2 місяців. При цьому рівень імунітету буде залежати від часу, що пройшов між вакцинацією свиноматки і пологами. Так, поросята, народжені від свиноматок, вакцинованих за 10 місяців до пологів, можуть бути вакциновані не раніше віку 5 недель.Бустер-вакцинація поросят цієї групи у віці 6 місяців викликала підйом титрів AT і стійкість до вірусу тривалістю до 4 років. У ряді дослідів поросят, народжених отсвіноматок, вакцинованих за 1 місяць до злучки, імунізували у віці 5,7 і 9 тижнів. Незважаючи на те, що перед вакцинацією тварини мали еквівалентні титри пасивно придбаних AT, в подальшому рівень імунітету залежав від часу вакцинації: чим пізніше вакциновані поросята, тим вище титри AT. Найкращі результати отримані в групі поросят, вакцинованих у віці 9 тижнів.

Встановлено, що при титрі ВНА в РН флюоресцирующих бляшок 1: 4 і вище тварини стійкі до внутрішньом`язові зараження епізоотичним штамом в дозі 104 ЛДзо, при титрі 1: 2 - хворіють і незалежно від результат становлять небезпеку як вірусоносії. Однак у значної кількості вакцинованих тварин ВНА до ВКЧС відсутні. Серед поросят 30-дн возрастаAT в титрі 1:16 були виявлені лише у 30%, у решти їх виявити удалось.В групах дорощування серопозитивних тварин було 16%, у групах відгодівлі через 140-200 та після вакцинації серопозитивні тварини становили 50%. Вакцинація Поросят від невакцинованих свиноматок у віці 9-90 дн. викликала у них імунна відповідь, який характеризувався появою в сироватці крові ВНА, а також захистом від прямого зараження вірулентним шт. ВКЧС в польових умовах на 12-18-й день після зараження. Високий рівень AT в сироватці був виявлений у поросят через 30-40 та після вакцинації. Відзначено, що материнські AT не пригнічує вакцинний вірус, завдяки чому у них і формується досить напружений вакцинальний імунітет. Всі контрольні поросята після прямого відображення впали від чуми. Отже, материнські AT не забезпечують досить надійний захист проти вірулентних штамів ВКЧС. Продолжітельностьпоствакцінального імунітету у поросят від нещеплених проти чуми свиноматок триваліше, ніж у поросят від вакцинованих свиноматок. У зв`язку з цим поросят від вакцинованих свиноматок краще вакцинувати в кінці 1-го міс. опоросу, однак при неблагополучних епізоотичних ситуаціях поросят можна вакцинувати після 2-тижневого віку і через місяць ревакцинувати. Вакцинація поросят, що володіють колостральной пасивним імунітетом, викликала поява у них різного імунного стану, яке залежало від кількість колостральной AT на момент вакцинації. Виявлено, що імунізація поросята аттенуіровані шт. Тіверваль ефективна тоді, коли нейтралізує активність сироватки нижче рівня колостральной нейтралізує активності. Це так званий поріг ефективності вакцинації, який настає у поросят у віці 30-35 днів. Автори вважають, що вакцинація поросят від імунних свиноматок у віці 30-35 днів надійно захищає їх від зараження вірулентним ВКЧС. Період напіврозпаду материнських AT у поросят від свиноматок, імунізованих за 9 і 5 місяців або за 85 днів до опоросу, становив 10 днів-AT у поросят володіли високим або середнім авідності до АГ вірусу і надавали помірний ефект на імунну відповідь у поросят після активної імунізації. У поросят від свиноматок, імунізованих за 55 днів до опоросу, період напіврозпаду молозивних AT становив 6 да- AT володіли слабкою активністю і взначною мірою придушували освіту AT після активної імунізації у поросят. У поросят від свиноматок, вакцинованих до супоросності, пасивний імунітет зберігався до 2 місяців, а у поросят від свиноматок, вакцинованих за 10 місяців до вагітності, пасивний імунітет зберігався до 5 місяців. Вакцинація в цей термін захищала більше 80% поросят. Якщо поросят вакцинували у віці 9 тижнів, то міцний імунітет у них підтримувався протягом 4 років.

В останні роки КЧС в господарствах, де проводиться щорічна планова профілактична імунізація тварин, часто проявляється по типу персистуючої інфекції, що значно ускладнює постановку діагнозу, оцінку епізоотичного статусу свинопоголів`я і своєчасність проведення протиепізоотичних заходів.

Для контролю ефективності профілактичної імунізації проти КЧС І.Ф. Вишняков і співавтори рекомендували проведення серологічного обстеження свинопоголів`я в РНФБ з використанням культури клітин РК-15.

До серотерапії класичної чуми свиней. При лікуванні поросят гіперімунні сироватками отримували різний результат залежно від стадії хвороби в момент серотерапії. Так, лікування свиней через 8 діб. після зараження не захищає їх від загибелі, а лікування в більш ранні терміни призводить до переводуострого течії в хронічне і дозволяє тваринам виживати протягом місяця після загибелі контрольних тварин. Однак у таких свиней виявляється постійна виремия - титр вірусу в лейкоцитах досягав 104 ККІД 50 / млн. кл., а введення імуномодуляторів хворою твариною призводило до швидкого летального результату протягом 1-2 діб. Всі інгібітори запальної реакції цілком здатні ліквідувати симптоми хвороби, але не ліквідувати персистенцию вірусу в клітинах-мішенях - макрофагах. У той же час всі активатори запальної реакції (ЛПС, ад`юванти, деякі медіатори і т.п.) підсилюють симптоми хвороби і прискорюють загибель свиней від КЧС (понад гострий перебіг). Одержано високоактивні моноспеціфіческой сироватки крові з титрами ВНА 1: 16-1: 64 і більше.

Хіміотерапія КЧС. У ВНІІВВіМ вперше встановили ефективність нетрадиційної хіміотерапії. Застосування хворим тваринам комплексу п
Увага, тільки СЬОГОДНІ!